內(nèi)皮細胞保護藥物靶標調(diào)節(jié)一氧化氮系統(tǒng)功能的分子機制.pdf

1、NO是內(nèi)皮細胞釋放的最重要的調(diào)節(jié)血管活性物質(zhì)之一，由eNOS催化產(chǎn)生。一氧化氮系統(tǒng)功能降低是內(nèi)皮細胞功能紊亂的重要機制之一。因此，恢復(fù)一氧化氮系統(tǒng)的正常功能是治療心血管疾病的重要治療策略，開發(fā)相關(guān)藥物靶點為研制治療心血管疾病的藥物具有指導(dǎo)作用。
　　目的:1研究ATP敏感性鉀通道(KATP)開放劑埃他卡林及其衍生物激活KATP對eNOS磷酸化的影響。2研究膽堿能受體激動劑對M3受體沉默后細胞釋放NO的影響。3激活非神經(jīng)性乙酰膽堿受

2、體對功能相關(guān)分子的影響。
　　方法:1在培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞上給予(1)10-9-10-5mol/L不同濃度的納他卡林孵育5 min，(2)預(yù)孵育格列苯脲30min，給予1μmol/L納他卡林刺激5 min，提取細胞總蛋白，用Western Blot法檢測eNOS磷酸化位點S1177、S635、T495、S116及S615的變化。2在培養(yǎng)的EA.hy926細胞上，加入特異性M3受體siRNAs，36h后用免疫印跡法測定M3受體蛋白表達量

3、;在M3受體沉默的細胞模型上，以NO釋放量為觀察指標，分別研究10μmol/L的乙酰膽堿、氧化震顫素和檳榔堿對細胞功能的影響。3在內(nèi)皮細胞上分別孵育10μmol/L乙酰膽堿、氧化震顫素、毛果蕓香堿和煙堿12h，用Western Blot法測定Destrin，F(xiàn)KBP1A，MIF和Profilin-1的表達變化。
　　結(jié)果:1KATP通道開放劑納他卡林可濃度依賴性的升高S1177、S635位點的磷酸化和T495位點的去磷酸化，而對S

4、116、S615位點無影響。此作用可被KATP通道特異性阻斷劑格列苯脲拮抗。2毛果蕓香堿沒能刺激正常內(nèi)皮細胞釋放NO;而乙酰膽堿、氧化震顫素和檳榔堿均可刺激正常內(nèi)皮細胞釋放NO，此作用在M3受體沉默的細胞上消失。3內(nèi)皮細胞被施以乙酰膽堿和氧化震顫素后Destrin明顯減少;FKBP1A的蛋白表達也在乙酰膽堿、氧化震顫素和煙堿孵育后下調(diào)近70％。毛果蕓香堿孵育12h后， profilin-1明顯增加，MIF下降;施與煙堿的細胞， prof