Hp聯(lián)合胃癌抗原致敏DC抗胃癌免疫的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)聯(lián)合胃癌抗原對(duì)人外周血單核細(xì)胞來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞(monocytederived dendritic cell,MoDC)成熟和抗腫瘤功能的影響,并篩選Hp聯(lián)合胃癌抗原致敏樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriti ccell,DC)的較優(yōu)刺激時(shí)間。
　　方法:利用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),進(jìn)

2、一步通過(guò)貼壁法獲得單核細(xì)胞,經(jīng)RPMI-1640完全培養(yǎng)基、細(xì)胞因子rhGM-CSF(1000U/ml)和rhIL-4(500U/ml)誘導(dǎo)培養(yǎng)5天后分化為未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(immature dendritic cell,iDC),培養(yǎng)過(guò)程中每3天半量換液和補(bǔ)充細(xì)胞因子rhGM-CSF和rhIL-4。在培養(yǎng)第5天分3組,Hp聯(lián)合胃癌抗原致敏組(Hp+Ly-mDC組)加入胃癌細(xì)胞BGC823裂解物0.1mg/ml,4h后再加入Hp全菌超聲

3、裂解物10μg/ml和rhTNF-α50ng/ml;胃癌抗原致敏組(Ly-mDC組)加入胃癌細(xì)胞BGC823裂解物0.1mg/ml,4h后再加入rhTNF-α50ng/ml;空白對(duì)照組(iDC組)未加胃癌抗原、Hp及rhTNF-α;分別誘導(dǎo)培養(yǎng)8h、24h、48h和72h收獲成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(maturedendriticcell,mDC)。然后用倒置相差顯微鏡觀察DC形態(tài);用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC表面CD83,CD86和HLA-DR的表達(dá);

4、MTT法檢測(cè)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中DC刺激自體T細(xì)胞增殖能力;不同組DC誘導(dǎo)的特異性CTL作為效應(yīng)細(xì)胞,胃癌細(xì)胞BGC823作為靶細(xì)胞,用LDH釋放法檢測(cè)特異性CTL的毒性殺傷作用;用ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞因子IL-12、IFN-γ的分泌水平。
　　結(jié)果:(1)觀察Ly-mDC組和Hp+Ly-mDC組具有形態(tài)不規(guī)則和大量毛刺狀突起的典型mDC形態(tài),兩組形態(tài)變化無(wú)明顯差異;(2)Hp+Ly-mDC組mDC表面標(biāo)記分子CD83、CD86和

5、HLA-DR平均表達(dá)百分率均高于Ly-mDC組和iDC組,其中CD83、CD86的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),HLA-DR差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05),Hp+Ly-mDC組和Ly-mDC組達(dá)到最高表達(dá)水平的刺激時(shí)間分別為24h和48h;(3)當(dāng)刺激時(shí)間為24h,Hp+Ly-mDC組DC刺激T細(xì)胞增殖能力達(dá)最大(SI=3.52±0.31);(4)Hp+Ly-mDC組特異性CTL對(duì)胃癌細(xì)胞的殺傷率高于Ly-mDC組和iDC

6、組(p<0.01),且刺激時(shí)間為24h的殺傷率(43.41±1.85)％高于48h(37.67±1.93)%(p<0.05);(5)Hp+Ly-mDC組細(xì)胞因子IL-12、IFN-γ的分泌量在刺激時(shí)間為24h達(dá)最高水平,分別為(627.24±31.05)pg/ml,(1313.56±48.41)pg/ml,顯著高于Ly-mDC組(p<0.01)。
　　結(jié)論:Hp全菌超聲裂解物可促進(jìn)DC的成熟和活化。Hp聯(lián)合胃癌抗原刺激DC抗原提呈