華支睪吸蟲成蟲抗原致敏樹突狀細胞誘導免疫應答的研究.pdf

1、目的: 通過研究華支睪吸蟲成蟲蟲體抗原（CA）體外致敏的樹突狀細胞（DCs）分泌IL-12p70、刺激初始性T 細胞增殖及誘導T 細胞分泌IFN-γ和IL-4 的能力，探討在華支睪吸蟲感染小鼠后CA 對DCs 免疫活性的影響及進而誘導免疫應答的類型。
　　 方法:
　　 （1）成蟲蟲體抗原的制備：從感染華支睪吸蟲的麥穗魚中獲取囊蚴，感染豚鼠，飼養(yǎng)50d 后，無菌取成蟲，經(jīng)勻漿，反復凍融，冷浸，超聲破碎，再冷浸后低溫超速離

2、心，收集上清即為CA。
　　 （2）DCs 的制備及鑒定：用rmGM-CSF 誘導分化BABL/c 小鼠骨髓細胞獲得DCs，通過觀察細胞形態(tài)、細胞表面分子及刺激T 細胞增殖進行DCs 的鑒定。
　　 （3）收集DCs，分組加相應致敏原， DC-LPS 組：LPS 1μg/ml；DC-RPMI 組：等量的RPMI-164 培養(yǎng)基；DC-CA 組：80μg/ml CA，置37℃，5％CO2 孵箱培養(yǎng)24h，收集上清測IL-1

3、2p70。
　　 （4）同種異體混合淋巴細胞反應(AMLR)：各組DCs 用絲裂霉素c 滅活后和同種異體淋巴細胞按一定比例混合共培養(yǎng)3d，收集上清測IFN-γ和IL-4，用CCK-8 試劑盒檢測T 細胞增殖情況。
　　 （5）ELISA 檢測細胞因子IL-12p70、IFN-γ和IL-4。
　　 結果:
　　 (1) 不同階段DCs 分化程度和形態(tài)各異，培養(yǎng)7d 后，細胞表面可見明顯的樹突狀突起。mDCs

4、 表面有大量毛刺樣突起，呈懸浮狀態(tài)。透射電鏡下可見典型的DCs 的形態(tài)特征。
　　 (2) 培養(yǎng)的細胞表面表達較高MHC II 和CD86 分子，經(jīng)LPS致敏后表達顯著上調。
　　 (3) DCs 分泌IL-12p70 的量：DC-CA 組分泌IL-12p70 量明顯高于DC-RPMI 組，而低于DC-LPS 組。
　　 (4) DCs 誘導T 細胞增殖情況：同種異體混合淋巴細胞反應，DC-CA 組對T 淋巴細胞

5、的刺激指數(shù)高于DC-RPMI 組，而低于DC-LPS 組。DC-CA 組和DC-LPS 組分別與DC-RPMI 組進行兩兩比較，差別有統(tǒng)計學意義。
　　 （5）DCs 和T 淋巴細胞共培養(yǎng)上清中IFN-γ的量：DC:T 為1:5和1:10 時，混合淋巴細胞共培養(yǎng)上清中，DC-CA組IFN-γ的水平明顯高于DC-RPMI組，而低于DC-LPS 組；DC:T 為1:20 時各組差異無統(tǒng)計學意義。
　　 （6）DCs 和T淋巴

6、細胞共培養(yǎng)上清中IL-4 的量：混合淋巴細胞共培養(yǎng)，各組培養(yǎng)上清中IL-4 的水平均非常低，差別無顯著性。
　　 結論:
　　 （1）CA 的刺激能促進BALB/c 小鼠骨髓來源的DCs 分泌IL-12。
　　 （2）CA致敏的DCs 具有啟動免疫應答的能力。
　　 （3）CA 致敏的DCs 能誘導Th0 細胞向Th1 方向極化，CA 致敏DCs 誘導的免疫反應與華支睪吸蟲感染早期的保護性免疫有密切相關。