翼狀胬肉中p16基因突變的研究.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)眼翼狀胬肉中p16基因內(nèi)外顯子1(exon1)、外顯子2(exon2)的分子遺傳學(xué)改變，以進(jìn)一步明確p16基因突變與翼狀胬肉之間的關(guān)系。
　　方法:共收集40例翼狀胬肉組織和同一時(shí)期的正常結(jié)膜組織樣本。組織基因組DNA提取試劑盒提取DNA，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)從基因組DNA中分別特異擴(kuò)增p16基因1、2外顯子片段。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)分離純化后采用PCR-SSCP

2、法對(duì)40例已確診的翼狀胬肉進(jìn)行p16基因exon1、exon2的突變研究，用雙脫氧鏈終止法對(duì)exon1、exon2發(fā)生突變的樣本進(jìn)行DNA測(cè)序測(cè)定，并分析測(cè)序結(jié)果。
　　結(jié)果:40例翼狀胬肉中，通過(guò)SSCP分析，p16基因外顯子，總突變率為22.5％(9/40)，明顯高于正常結(jié)膜組(P＜0.05)，其中exon1、exon2a、exon2b、exon2c的突變率分別為2.5％(1/40)、0％(0/40)、12.5％(5/40)、

3、7.5％(3/40)，p16基因的兩個(gè)外顯子中，外顯子2的改變明顯高于外顯子1(P＜0.05)。p16基因突變與患者職業(yè)有關(guān)，戶外工作患者的突變率明顯高于戶內(nèi)工作者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但與患者性別、年齡、翼狀胬肉進(jìn)展時(shí)期、初復(fù)發(fā)情況等臨床參數(shù)無(wú)顯著性相關(guān)(P＞0.05)。通過(guò)測(cè)序，9例翼狀胬肉樣本，相對(duì)正常結(jié)膜組織，均發(fā)生了改變。如:exon1(P6)76堿基處G換成T，exon2b(P32)624堿基處T換成A，exo