年齡及單眼形覺剝奪對(duì)大鼠視皮層AMPA受體GluR2-3亞單位表達(dá)的影響.pdf

1、目的: 觀察視覺發(fā)育關(guān)鍵期內(nèi)年齡及視覺經(jīng)驗(yàn)的改變對(duì)大鼠初級(jí)視皮層(visualcortex，VC)II/III層α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異噁唑丙酸受體(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionie acid receptor，AMPAR，簡(jiǎn)稱AMPA受體)GluR2/3亞單位表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討GluR2/3受體在視覺可塑性中可能的作用機(jī)制。 方法:

2、1.25只健康新生Wistar大鼠，隨機(jī)分成5組：NP7、NP14、NP21、NP28及NP45，每組5只，在同樣的環(huán)境下正常飼養(yǎng)，分別于生后7d、14d、21d、28d及45d麻醉、灌注、固定、開顱取腦，置于4℃24％多聚甲醛后固定過夜。4℃30％蔗糖溶液2次脫水至沉底，OCT包埋，行12μm冰凍切片，按照常規(guī)HE及熒光免疫組織化學(xué)步驟染色，熒光顯微鏡下觀察GluR2/3亞單位在視皮層的表達(dá)情況，Olympus顯微攝像系統(tǒng)采集圖片，I

3、PP6.0圖像分析系統(tǒng)測(cè)定陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)及平均光密度值(average optical density，AOD)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)的形式表示，SPSS16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同發(fā)育時(shí)限的陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)及AOD值比較采用單因素方差分析。 2.15只健康新生Wistar大鼠，隨機(jī)分成3組：MD21、MD28及MD45，每組5只，與第一部分正常組(NP21、NP28及NP45)在同樣的環(huán)境下飼養(yǎng)，于生后14d縫

4、合右眼，制作單眼形覺剝奪模型，繼續(xù)飼養(yǎng)至21d，28d，45d灌注取材。實(shí)驗(yàn)步驟、圖像采集及陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)、AOD值的分析方法均同第一部分。正常組與單眼形覺剝奪組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果: 1.HE染色結(jié)果：正常大鼠視皮層結(jié)構(gòu)清晰，各層神經(jīng)元排列整齊。單眼形覺剝奪組大鼠剝奪眼對(duì)側(cè)視皮層與正常大鼠比較未見明顯異常。 2.熒光免疫組織化學(xué)染色：熒光顯微鏡下觀察，GluR2/3受體陽性反應(yīng)產(chǎn)物呈綠色熒光

5、，在大鼠皮層組織廣泛分布。視皮層17區(qū)各層可見不同密度的陽性細(xì)胞分布，粗略觀察可見II/III層分布較密集，I層幾乎未見明顯陽性細(xì)胞，IV、V及VI層中等密度。陽性部位主要位于細(xì)胞膜和胞漿。 3.比較不同發(fā)育時(shí)期大鼠初級(jí)視皮層II/III層GluR2/3受體的陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)及AOD值(×200視野)。陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)：NP7為143.13±9.53，NP14為135.20±9.47，NP21為150.40±8.19，NP28為154.

6、40±10.23，NP45為164.93±9.14，組間行單因素方差分析，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AOD值：NP7為0.0545±0.0107，NP14為0.0655±0.0118，NP21為0.0848±0.0114，NP28為0.0967±0.0147，NP45為0.1051±0.0152，組間行單因素方差分析，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由上可以看出GluR2/3受體陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)及AOD值均隨年齡增長(zhǎng)呈現(xiàn)逐步遞增趨勢(shì)。

7、 4.單眼形覺剝奪組大鼠剝奪眼對(duì)側(cè)視皮層Il/III層GluR2/3受體表達(dá)產(chǎn)物較正常同齡組減少，表現(xiàn)為陽性細(xì)胞數(shù)量減少及陽性表達(dá)產(chǎn)物密度減低。GluR2/3受體陽性細(xì)胞數(shù)為：MD21為140.13±11.06：MD28為141.27±8.70；MD45為145.13±8.47。AOD值為：MD21為0.0656±0.0120；MD28為0.0813±0.0111；MD45為0.0893±0.0137。剝奪組視皮層的GluR2/

8、3陽性細(xì)胞數(shù)量及AOD值均較正常組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 從生后7天到視覺發(fā)育關(guān)鍵期末大鼠視皮層II/III層GluR2/3受體表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)量及AOD值，均隨年齡增長(zhǎng)呈逐步遞增趨勢(shì)，呈現(xiàn)年齡依賴性規(guī)律，推測(cè)GluR2/3的表達(dá)與視皮層突觸成熟及功能發(fā)育相關(guān)，其年齡依賴性可能是中樞神經(jīng)系統(tǒng)視覺發(fā)育及可塑性的重要機(jī)制。而單眼形覺剝奪大鼠剝奪眼對(duì)側(cè)視皮層II/III層GluR2/3受體的表達(dá)量低于正常組，推測(cè)視覺