幼年和成年單眼形覺剝奪性弱視大鼠視皮質(zhì)PSD-95表達的研究.pdf

1、研究背景：
　　 弱視是兒童時期常見的嚴(yán)重影響視功能發(fā)育的眼病，患病率約為1％-5%。弱視的發(fā)病機制與視覺神經(jīng)元突觸的發(fā)育和可塑性變化密切相關(guān)，突觸可塑性的變化是形成弱視的中心環(huán)節(jié)。突觸后致密蛋白-95(PSD-95)在調(diào)節(jié)突觸發(fā)育和可塑性中起關(guān)鍵作用，在蛋白水平已證實PSD-95參與視覺早期的發(fā)育，而在基因水平的相關(guān)研究則相對較少。
　　 目的：
　　 觀察幼年和成年單眼形覺剝奪性弱視大鼠和正常發(fā)育大鼠視皮質(zhì)中

2、PSD-95的表達情況，從分子水平來探索弱視的發(fā)病機制，為臨床預(yù)防與治療弱視提供新的思路。
　　 方法：
　　 1、選取14日齡SD大鼠48只，雌雄不限，隨機分為單眼剝奪組(MD)24只和正常對照組(NC)24只。NC組隨機分為正常組Ⅰ組(NCⅠ)、正常組Ⅱ組(NCⅡ)，每組各12只；MD組隨機分為剝奪組Ⅰ組(MDⅠ)、剝奪組Ⅱ組(MDⅡ)，每組各12只。MD組所有大鼠在生后14天行單側(cè)眼瞼縫合術(shù)建立單眼剝奪模型。

3、>　　 2、NCⅠ組和MDⅠ組大鼠共同飼養(yǎng)至生后45天(P45，幼年期)取材，所得標(biāo)本為NCP45、MDP45；NCⅡ組和MDⅡ組大鼠均飼養(yǎng)至生后90天(P90，成年期)取材，所得標(biāo)本為NCP90、MDP90，MD組取材前均經(jīng)圖形視覺誘發(fā)電位(P-VEP)檢測證實造模成功。
　　 3、應(yīng)用Nissl染色法觀察各組大鼠視皮質(zhì)神經(jīng)元的形態(tài)改變并定位分層，采用免疫組織化學(xué)方法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測各組大鼠視皮質(zhì)

4、中PSD-95蛋白表達和PSD-95mRNA轉(zhuǎn)錄水平的變化。
　　 4、通過攝像顯微鏡照相，圖像分析系統(tǒng)進行圖像分析得出PSD-95陽性反應(yīng)產(chǎn)物的平均光密度(AOD)值和PSD-95mRNA的相對表達量，數(shù)據(jù)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，相同發(fā)育階段的組間比較采用成組設(shè)計的t檢驗，不同發(fā)育階段的組間比較采用方差分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、P-VEP檢測結(jié)果：經(jīng)P-VEP檢測

5、后可見，正常對照組大鼠P-VEP均有穩(wěn)定的波形、潛伏期和振幅。在幼年期(P45)和成年期(P90)，MD組剝奪眼與NC組大鼠眼、MD組未剝奪眼比較，其P-VEP的P波潛伏期延長、波形不穩(wěn)定、波幅下降，差異均有顯著性意義(P<0.05)；在幼年期和成年期，MD組未剝奪眼與NC組大鼠眼比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 2、Nissl染色結(jié)果：NC組大鼠視皮質(zhì)神經(jīng)元呈空泡狀，胞漿著色，核不著色。視皮質(zhì)的神經(jīng)元分布呈層狀

6、，從皮質(zhì)淺層至深層依次為：分子層(Ⅰ)、外顆粒層(Ⅱ)、外錐體層(Ⅲ)、內(nèi)顆粒層(Ⅳ)、內(nèi)錐體層(Ⅴ)、多形細胞層(Ⅵ)。與NC組大鼠比較，MD組大鼠剝奪眼對側(cè)視皮質(zhì)Nissl染色結(jié)果未見明顯異常。
　　 3、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：光鏡下可見，PSD-95陽性反應(yīng)產(chǎn)物主要表達在神經(jīng)元的胞體中，呈棕色顆粒狀廣泛分布于視皮質(zhì)各層。PSD-95陽性反應(yīng)產(chǎn)物在NC組大鼠視皮質(zhì)中表達密集，其AOD值在NCP45組為0.397±0.008，

7、在NCP90組為0.318±0.007，兩組間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；MD組大鼠視皮質(zhì)中PSD-95陽性表達產(chǎn)物的數(shù)量均減少，密度均減低，其AOD值在MDP45組為0.352±0.005(P45<0.01)，在MDP90組為0.259±0.011(P90<0.01)；MD組各發(fā)育階段間PSD-95陽性反應(yīng)產(chǎn)物的表達差異有顯著性(P<0.05)。
　　 4、RT-PCR法檢測結(jié)果：PSD-95mRNA在各組大鼠的視皮質(zhì)

8、中均有表達。PSD-95mRNA的相對表達量在NCP45組為0.667±0.009，在NCP90組為0.399±0.019，兩組間的差異有顯著性(P<0.05)；不同發(fā)育階段MD組與NC組比較，PSD-95mRNA的表達均有明顯減少，其相對表達量在MDP45組為0.470±0.005(P45<0.01)，在MDP90組為0.350±0.005(P90<0.01)；MD組各發(fā)育階段間PSD-95mRNA的相對表達量差異有顯著性(P<0.0

9、5)。
　　 結(jié)論：
　　 1、在視覺發(fā)育的關(guān)鍵期內(nèi)，視覺經(jīng)驗通過調(diào)節(jié)視覺神經(jīng)元間的突觸聯(lián)系來調(diào)控PSD-95的表達，PSD-95是弱視發(fā)病機制的重要分子生物學(xué)基礎(chǔ)之一；
　　 2、異常視覺經(jīng)驗?zāi)軌蛴绊懗赡甏笫笠暺べ|(zhì)內(nèi)PSD-95的表達，推測成年大鼠的視皮質(zhì)神經(jīng)元仍具有突觸可塑性；
　　 3、與幼年期正常發(fā)育大鼠比較，成年期正常發(fā)育大鼠視皮質(zhì)中PSD-95的表達減少，推測年齡因素是PSD-95表達的影響因