纖維蛋白膠聯(lián)合反義寡核苷酸治療預(yù)防移植靜脈再狹窄實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分纖維蛋白膠外支架預(yù)防移植靜脈再狹窄實(shí)驗(yàn)研究 目的：自使用機(jī)械方法預(yù)防移植靜脈再狹窄被提出以來，應(yīng)用非限制性，生物可吸收材料作為外周支持預(yù)防移植靜脈再狹窄已經(jīng)被證實(shí)有效，但它們?nèi)杂凶陨砣毕?。本?shí)驗(yàn)將纖維蛋白膠作為外周支持，研究其對兔移植靜脈內(nèi)膜和中膜增生的影響。 方法：24只雄性新西蘭大耳白兔隨機(jī)分為非支架組(NS組n=12)和纖維蛋白膠支架組(FS組n=12)。建立兔頸外靜脈頸總動(dòng)脈旁路移植術(shù)模型。FS組給予纖維

2、蛋白膠作為外支架。術(shù)后28天取出移植靜脈，進(jìn)行組織病理分析和免疫組織化學(xué)分析。 結(jié)果：與NS組相比，F(xiàn)S組移植靜脈內(nèi)膜和中膜增生程度明顯減輕。免疫組化結(jié)果顯示與NS組相比，F(xiàn)S組移植靜脈細(xì)胞增殖核抗原表達(dá)明顯受到抑制；NS組內(nèi)皮層損傷嚴(yán)重，有淋巴細(xì)胞侵潤，在FS組內(nèi)皮層則幾乎完好無損；在NS組平滑肌細(xì)胞增殖活躍且向內(nèi)膜遷移，F(xiàn)S組平滑肌細(xì)胞增殖受到抑制，且向外膜遷移；在FS組移植靜脈外膜有豐富的成熟微小血管網(wǎng)形成，但是在NS組，

3、微小血管數(shù)量則非常少。 結(jié)論：纖維蛋白膠外支架能給兔移植靜脈提供足夠的外周支持，顯著抑制其內(nèi)膜和中膜增生程度。該作用與保護(hù)血管內(nèi)皮完整、抑制增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)、促使平滑肌細(xì)胞向外膜遷移和形成外膜新生血管網(wǎng)有關(guān)。 第二部分纖維蛋白膠外支架提高血管外膜腺病毒轉(zhuǎn)染效率實(shí)驗(yàn)研究目的：由于血流沖刷，治療基因停留時(shí)間短，且缺血時(shí)間長會(huì)加重內(nèi)膜損傷，經(jīng)血管腔內(nèi)途徑治療基因轉(zhuǎn)染抑制移植靜脈內(nèi)膜增生受到限制。經(jīng)血管外膜轉(zhuǎn)染治療基因是有效的

4、變通方法，但是受限于低轉(zhuǎn)染效率。在本實(shí)驗(yàn)，我們將攜帶報(bào)告基因的腺病毒載體與纖維蛋白膠混合，噴灑在移植靜脈外膜，以觀察纖維蛋白膠是否能提高血管外膜基因轉(zhuǎn)染效率。 方法：健康純種新西蘭大耳白兔，隨機(jī)分為兩組，每組8只動(dòng)物：(1)單純腺病毒對照組；(2)纖維蛋白膠腺病毒組。建立兔頸外靜脈頸總動(dòng)脈旁路移植術(shù)模型。對照組移植靜脈外周單獨(dú)給予攜帶β-半乳糖苷酶報(bào)告基因的腺病毒載體，纖維蛋白膠腺病毒組外周給予纖維蛋白膠腺病毒載體混合物。分別于

5、術(shù)后第7天和第14天取出移植靜脈，評價(jià)轉(zhuǎn)染效率。 結(jié)果：術(shù)后第7天，對照組腺病毒轉(zhuǎn)染效率低下，僅為2.1±0.5％，而纖維蛋白膠腺病毒組表現(xiàn)為高轉(zhuǎn)染效率，為13.2±4.6％，二者比較有高度顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；術(shù)后第14天，對照組偶見陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞，轉(zhuǎn)染率為0％，而在纖維蛋白膠腺病毒組雖然陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞較術(shù)后第7天為少，但仍保持高轉(zhuǎn)染率(6.3±3.8％)。 結(jié)論：纖維蛋白膠作為一種新的藥物緩釋系統(tǒng)，能明顯提高移植靜脈外膜基因

6、轉(zhuǎn)染效率。 第三部分纖維蛋白膠外支架轉(zhuǎn)染PCNA基因反義寡核苷酸預(yù)防移植靜脈再狹窄實(shí)驗(yàn)研究 目的：血管外支架和血管外膜基因治療均是治療移植靜脈內(nèi)膜和中膜增生的方法，但是至今沒有將二者聯(lián)合使用預(yù)防移植靜脈再狹窄的報(bào)道。本研究構(gòu)造攜帶PCNA基因反義寡核苷酸的腺病毒，將其與纖維蛋白膠混合，經(jīng)血管外膜途徑給藥，以期得到二者對預(yù)防移植靜脈再狹窄有協(xié)同作用的直接證據(jù)。 方法：24只雄性新西蘭大耳白兔隨機(jī)分為非支架組(NS組

7、n=8)；纖維蛋白膠支架組(FS組n=8)；纖維蛋白膠聯(lián)合反義PCNA組(AS/FS組n=8)。建立兔頸外靜脈頸總動(dòng)脈旁路移植術(shù)模型。FS組給予纖維蛋白膠作為外支架，AS/FS組給予纖維蛋白膠和反義PCNA混合物。術(shù)后28天取出移植靜脈，進(jìn)行組織病理分析和免疫組織化學(xué)分析。 結(jié)果：與NS組和FS組相比，AS/FS組移植靜脈內(nèi)膜和中膜增生厚度明顯減少，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，F(xiàn)S組PCNA表達(dá)和NS組相比，明顯減少；