大黃（庶蟲）蟲丸防治實驗性動脈粥樣硬化機制的研究.pdf

1、目的：心腦血管疾病因發(fā)病年齡不斷提前，發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢而受到現(xiàn)代醫(yī)學界的廣泛重視。動脈粥樣硬化(AS)是心血管疾病的重要病因之一，目前動脈粥樣硬化形成與發(fā)展的分子生物學方面的發(fā)生機制，已成為當今心腦血管疾病領(lǐng)域的熱點。 大黃蟲丸出自漢張仲景著《金匱要略.血痹虛勞病脈癥并治第六》中，由熟大黃、黃芩、生地黃、蟲、水蛭、蠐螬、虻蟲、桃仁、杏仁、芍藥、干漆、甘草十二味藥物組成，具有疏通經(jīng)絡、破瘀生新、緩中補虛之功效。以往該方

2、在臨床上主要用于肝炎，肝硬化，近年來研究表明此方還具有改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、消炎止痛等功效，在臨床治療心腦血管疾病中取得了較好的療效。為探討該藥臨床療效并提供科學依據(jù)，根據(jù)中醫(yī)謹守病機，異病同治的原則，采用高脂飼喂法復制大鼠動脈粥樣硬化模型，觀察大黃蟲丸不同劑量抗動脈粥樣硬化的藥效及作用機制。 方法： 1.實驗藥物大黃蟲丸購自徐州頤海藥業(yè)有限公司，批號：060402，實驗前將藥物分別研成粉劑按計量比配制成兩個濃度混

3、懸液(0.7g/kg，1.4g/kg)供使用。血脂康膠囊購自北大威信生物科技有限公司，批號：20061211，實驗前將藥物按劑量比配制成混懸液(0.3g/kg)。(用藥量相當于成人每日每公斤體重的15倍)。 2.AS動物模型的建立飼喂基礎(chǔ)飼料的大鼠40只，常規(guī)觀察一周隨機分5組，對照組、模型組、大黃蟲丸低劑量組、大黃蟲丸高劑量組、陽性對照組。除對照組給與基礎(chǔ)飼料外，其余各組飼喂高脂飼料(配方1％膽固醇、0.35％膽酸、5％煉制豬

4、油、0.1％丙硫氧嘧啶及基礎(chǔ)飼料)的大鼠按70萬單位vitD3/kg的總劑量分3天腹腔注射，對照組同時給予等體積的生理鹽水腹腔注射，連續(xù)觀察21天。后對照組、模型組：每天灌胃蒸餾水(1ml/100g)；大黃蟲丸低劑量組：大黃蟲丸混懸液0.7g生藥/kg灌胃；大黃蟲丸高劑量組：大黃蟲丸混懸液1.4g生藥/kg灌胃；陽性對照組：血脂康混懸液0.3 g/kg灌胃。繼續(xù)觀察8周。 3.觀察指標：實驗結(jié)束后大鼠斷頭取血，低溫離心，3000

5、r/min；15min分離血清，血脂(TC、TG、HDL-C、LDL-C)采用酶法；一氧化氮(NO)采用硝酸還原法；內(nèi)皮素(ET)采用放射免疫法；丙二醛(MDA)采用硫代巴比妥酸比色法；超氧化物岐化酶(SOD)采用黃嘌呤氧化酶法。處死大鼠并立即刨取主動脈弓，剝離外膜附著組織，一部分置于10％福爾馬林固定，石蠟切片，HE染色，觀察病理變化；另一部分采用免疫組化染色，觀察血管壁NF-kappaB的表達，胞漿染色呈棕黃色表示陽性，并計算其陽性

6、細胞率。 4.統(tǒng)計學處理采用SPSS1.10forwindows統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計。數(shù)據(jù)用庶蟲±s表示，采用組間對照方差分析法。 結(jié)果： 1.大黃蟲丸對大鼠血清血脂的影響模型組血清TG、TC、LDL-C含量比對照組明顯升高(P＜0.01，P＜0.05)，血清HDL-C明顯降低(P＜0.05)，表明模型組出現(xiàn)脂代謝紊亂。 血脂康組TG、TC、LDL-1含量較模型組明顯降低(P＜0.05)；大黃蟲丸低劑量組

7、與模型組對比TG、LDL-C明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)，與血脂康組對比TC明顯升高，有顯著性差異(P＜0.05)；大黃蟲丸高劑量組與模型組對比TG、TC、LDL-C明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)，HDL-C含量明顯升高，有顯著性差異(P＜0.01)。與血脂康組對比HDL-C明顯升高，有顯著性差異(P＜0.05)。這表明大黃蟲丸高、低劑量均有降血脂的作用，且大黃蟲丸高劑量較低劑量作用更明顯，升高HDL-C優(yōu)于血脂康組。

8、 2.大黃蟲丸對大鼠血清NO、ET的影響模型組血清NO水平較對照組顯著降低(P＜0.05)，ET水平明顯升高(P＜0.05)；血脂康組與模型組比較NO水平升高，ET降低有顯著性差異(P＜0.05)；大黃蟲丸低劑量組與模型組對比NO水平升高，ET水平降低但無顯著性差異；大黃蟲丸高劑量組與模型組對比NO顯著升高，ET水平明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)；大黃蟲丸高、低劑量組與血脂康組對比均無顯著性差異，但其作用趨勢為大黃蟲丸高劑量組＞

9、血脂康組＞大黃蟲丸低劑量組。 3.大黃蟲丸對血清SOD，MDA的影響模型組血清SOD活力較對照組明顯降低(P＜0.05)，MDA含量明顯升高(P＜0.01)；血脂康組較模型組SOD水平明顯升高，MDA含量降低，有顯著性差異(P＜0.05)；大黃蟲丸低劑量組與模型組對比血清SOD活力升高(P＜0.05)，與血脂康組對比SOD活力降低，有顯著性差異(P＜0.05)；大黃蟲丸高劑量組與模型組對比血清SOD活力顯著升高(P＜0.01)，

10、MDA含量降低(P＜0.05)；與血脂康組對比無顯著性差異。 4.大黃蟲丸對血管壁NF-kappaB表達的影響正常對照組：未見棕黃色顆粒(一)。模型組：病變早期血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞及泡沫細胞胞漿內(nèi)呈強陽性表達(++)，病變晚期結(jié)構(gòu)破壞陽性表達減弱。血脂康組：血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞及泡沫細胞胞漿內(nèi)呈弱陽性表達(±)。大黃蟲丸低劑量組：血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞及泡沫細胞胞漿內(nèi)呈陽性表達(+)，但較模型組早期變化明顯減弱。大黃蟲

11、丸高劑量組：血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞及泡沫細胞胞漿內(nèi)呈弱陽性表達(±)。模型組血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞胞漿中陽性細胞比例顯著高于對照組(P＜0.01)；血脂康組血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞胞漿中陽性細胞比例顯著低于模型組(P＜0.01)；大黃蟲丸高劑量、低劑量組NF-kappaB表達比例顯著低于模型組(P＜0.01)，但低劑量組與血脂康組相比陽性細胞率明顯升高(P＜0.05)。表明大黃蟲丸高、低劑量均可抑制血管壁NF-kappaB表達;其抑

12、制NF-kappaB表達作用結(jié)果為：大黃蟲丸高劑量組＞血脂康＞大黃蟲丸低劑量組。 5.主動脈病理檢查：正常對照組：各層結(jié)構(gòu)規(guī)整，內(nèi)膜無脂質(zhì)沉積改變，含少量膠原纖維和平滑肌纖維，彈力纖維分布均勻，未見異常改變。模型組：主動脈壁內(nèi)膜顯著增厚，內(nèi)膜局部向管腔突起，中膜平滑肌增生，排列紊亂，大量的斑塊形成，有明顯鈣化。血脂康組：主動脈內(nèi)膜無明顯增厚，彈力纖維形態(tài)稍迂曲。未見膽固醇結(jié)晶，亦未見溶解壞死組織。大黃蟲丸低劑量組：管壁無明顯增厚

13、，內(nèi)膜輕度增生，中膜內(nèi)有局限性鈣化，平滑肌增生不明顯。大黃蟲丸高劑量組：血管各層結(jié)構(gòu)規(guī)整，平滑肌增生不明顯，中膜內(nèi)偶見鈣化。結(jié)論： 1.大黃蟲丸降低血清TC、TG、LDL-C的含量，具有降血脂的作用。 2.大黃蟲丸可以使血清MDA的含量降低，SOD的含量升高，具有抗氧化作用。 3.大黃蟲丸可以使血清ET的含量降低，NO的含量升高，具有調(diào)節(jié)NO/ET平衡作用。 4.大黃蟲丸可抑制主動脈血管壁中NF-kapp