大黃(庶蟲)蟲丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化大鼠TNF-a及CD40L表達(dá)的影響.pdf

1、目的：動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是危害人體生命健康最嚴(yán)重的疾病之一，是心腦血管疾病共同的病理基礎(chǔ)。一直以來AS的研究被視為研究心腦血管疾病發(fā)病機(jī)理及尋求治療手段的突破點(diǎn)。目前，動(dòng)脈粥樣硬化形成與發(fā)展的分子生物學(xué)方面的發(fā)生機(jī)制，已成為當(dāng)今心腦血管疾病領(lǐng)域研究熱點(diǎn)，已引起社會(huì)廣泛關(guān)注。
　　 腫瘤壞死因子-α(TNF-α)主要由單核細(xì)胞和（或）巨噬細(xì)胞分泌后，通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的增殖、影響脂類攝取與代謝，使血脂水平增高及增加

2、細(xì)胞間質(zhì)膠原的合成等參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成。
　　 CD40-CD40L系統(tǒng)是炎癥過程中重要的信號(hào)通路，廣泛參與了細(xì)胞免疫、體液免疫和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)，動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵細(xì)胞成分上均有CD40和CD40L表達(dá)，兩者結(jié)合能誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)多種活性介質(zhì)，參與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。阻斷CD40-CD40L通路可防止動(dòng)脈粥樣硬化或阻止已形成的斑塊進(jìn)展，為預(yù)防心血管事件的發(fā)生提供了一個(gè)新的途徑。
　　 TNF-a及CD40L

3、是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的主要危險(xiǎn)因素，有效地控制TNF-a及CD40L表達(dá)是預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵。
　　 大黃蜜蟲丸是活血化瘀的祖方，出自漢張仲景著《金匱要略·血痹虛勞病脈癥并治第六》中，由熟大黃、黃芩、生地黃、蜜蟲、水蛭、蠐螬、虻蟲、桃仁、杏仁、芍藥、干漆、甘草12味藥物組成，具有疏通經(jīng)絡(luò)、破瘀生新、緩中補(bǔ)虛之功效。本方配伍獨(dú)特，既有破血逐瘀之蟲類藥，又有滋陰養(yǎng)血清熱之品。近10多年來對(duì)大黃(?)蟲丸的臨床應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)研究在不斷深

4、入和擴(kuò)大，眾多醫(yī)家根據(jù)其扶正不留瘀，祛瘀不傷正這一特點(diǎn)，用于治療多種疾病取得了滿意的療效。大黃蜜蟲丸在臨床上應(yīng)用十分廣泛，但在循環(huán)系統(tǒng)方面效果顯著。本實(shí)驗(yàn)主要采用經(jīng)典喂養(yǎng)法加VitD3復(fù)制動(dòng)脈粥樣硬化模型，從血脂水平、血管內(nèi)皮細(xì)胞功能及TNF-a及CD40L炎癥因子表達(dá)等方面觀察大黃蜜蟲丸抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。
　　 方法：
　　 1實(shí)驗(yàn)藥物大黃(?)蟲丸購自徐州頤海藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：060402，實(shí)驗(yàn)前將藥物分別

5、研成粉劑按計(jì)量比例制成兩個(gè)濃度混懸液(0.7g/kg，1.4g/kg)供使用。血脂康膠囊購自北大威信生物科技有限公司，批號(hào)：20061211，實(shí)驗(yàn)前將藥物按計(jì)量比配成混懸液(0.3g/kg)（用藥量相當(dāng)于成人每日每公斤體重的15倍）。
　　 2AS動(dòng)物模型的建立飼喂基礎(chǔ)飼料的大鼠40只，常規(guī)觀察一周隨即分為5組，每組8只，對(duì)照組、模型組、大黃蜜蟲丸高劑量組、大黃蜜蟲丸低劑量組、陽性對(duì)照組。除對(duì)照組給與基礎(chǔ)飼料外，其余各組飼喂高脂

6、飼料（配方1％膽固醇、0.35％膽酸、5％煉制豬油、0.1％丙硫氧嘧啶及基礎(chǔ)飼料）的大鼠按70萬單位VitD3/kg的總劑量分三天腹腔注射，連續(xù)觀察21天后.模型組：每天灌胃蒸餾水(1ml/100g)；大黃(?)蟲丸低劑量組：大黃蜜蟲丸混懸液0.7g生藥/kg灌胃；大黃蜜蟲丸高劑量組：大黃蜜蟲丸混懸液1.4g生藥/kg灌胃；陽性對(duì)照組：血脂康混懸液0.3g/kg灌胃。繼續(xù)觀察8周。
　　 3觀察指標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后大鼠斷頭取血，低溫離

7、心3000r/min；15min分離血清，血脂中的總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)采用酶法；一氧化氮(NO)采用硝酸還原法；內(nèi)皮素(ET)采用放射免疫法；腫瘤壞死因子(TNF-a)用放射免疫平衡法測定。CD40檢測采用免疫組化法進(jìn)行檢測。具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。處死大鼠并立即剖取主動(dòng)脈弓，剝離外膜附著組織，一部分置于10％福爾馬林固定，石蠟切片，用于HE染色、免疫

8、組化染色，觀察病理變化。
　　 4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.0forwindows統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。數(shù)據(jù)用又±s表示，采用組間對(duì)照方差分析法。
　　 結(jié)果：
　　 1大黃蜜蟲丸對(duì)模型大鼠血清血脂水平的影響模型組血清TG，TC，LDL-C含量比對(duì)照組明顯升高(P＜0.05)，血清HDL-C明顯降低(P＜0.01)，表明模型組出現(xiàn)脂代謝紊亂（血脂異常）。血脂康組TG，TC，LDL-C含量較模型組明顯降低(P＜0

9、.05)；大黃(?)蟲丸(0.7g生藥/kg)與模型組對(duì)比TG，LDL-C明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)，與血脂康組對(duì)比，其降低TC作用不及血脂康組，有顯著性差異(P＜0.05)；大黃蜜蟲丸(1.4g生藥/kg)與模型組對(duì)比TG，TC，LDL-C明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)，HDL-C含量明顯升高(P＜0.01)，有顯著差異(P＜0.01)，與血脂康組對(duì)比，LDL-C明顯升高，有顯著性差異(P＜0.05)，且降低TG、

10、LDL-C作用明顯。表明大黃蜜蟲丸高低劑量均有調(diào)節(jié)血脂的作用，且大黃蜜蟲丸高劑量較低劑量作用更明顯，升高HDL-C優(yōu)于血脂康組。
　　 2大黃(?)蟲丸對(duì)模型大鼠血清NO、ET水平的影響模型組血清NO較對(duì)照組顯著降低(P＜0.05)，ET水平明顯升高(P＜0.05)；血脂康組與模型組比較NO水平升高，ET降低，有顯著性差異(P＜0.05)；大黃蜜蟲丸低劑量組與模型組對(duì)比血清NO水平升高，ET水平降低但無顯著性差異；大黃蜜蟲丸高劑

11、量組與模型組對(duì)比血清NO水平顯著升高，ET水平明顯降低；其作用趨勢為大黃蜜蟲丸高劑量組＞血脂康組＞大黃蜜蟲丸低劑量組。
　　 3主動(dòng)脈病理檢查：正常對(duì)照組：光鏡下組織學(xué)切片示正常主動(dòng)脈壁內(nèi)膜、中膜、外膜均清晰可見，各層結(jié)構(gòu)規(guī)整，內(nèi)膜無脂質(zhì)沉積改變，含少量膠原纖維和平滑肌纖維，彈力纖維分布均勻，未見異常改變。模型組：光鏡下主動(dòng)脈壁內(nèi)膜顯著增厚向管腔突起，病灶表面由纖維細(xì)胞、膠原纖維構(gòu)成纖維帽，其下方有脂質(zhì)、少許炎細(xì)胞，可見粥樣斑塊

12、形成。大黃蜜蟲丸低劑量組：主動(dòng)脈內(nèi)膜稍有增厚，病灶可見表層纖維帽較薄，其下為大量泡沫細(xì)胞。大黃蜜蟲丸高劑量組：主動(dòng)脈內(nèi)膜無明顯增厚，平滑肌細(xì)胞排列較規(guī)整，但可見輕度水腫。未見膽固醇結(jié)晶，亦未見溶解壞死組織。血脂康組：主動(dòng)脈內(nèi)膜無明顯增厚，彈力纖維形態(tài)稍迂曲。未見膽固醇結(jié)晶，亦未見溶解壞死組織。
　　 4大黃蜜蟲丸對(duì)模型大鼠血清TNF-a水平的影響模型組血清比對(duì)照組TNF-a顯著升高(P＜0.05)；血脂康組、大黃蜜蟲丸低劑量組、

13、大黃蜜蟲丸高劑量組與模型組對(duì)比血清中的TNF-a顯著降低(P＜0.05)；血脂康組、大黃蜜蟲丸低劑量組、大黃蜜蟲丸高劑量組血清TNF-a水平無明顯差別。
　　 5大黃(?)蟲丸對(duì)主動(dòng)脈血管壁CD40L表達(dá)的影響正常對(duì)照組：未見棕黃色顆粒（-）。模型組：血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及泡沫細(xì)胞胞漿內(nèi)呈強(qiáng)陽性表達(dá)(++)；血脂康組：血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及泡沫細(xì)胞胞漿內(nèi)呈弱陽性表達(dá)（±）；大黃蜜蟲丸低劑量組：血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及泡

14、沫細(xì)胞胞漿內(nèi)呈陽性表達(dá)(+)；大黃蜜蟲丸高劑量組血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及泡沫細(xì)胞胞漿內(nèi)呈弱陽性表達(dá)(±)。表明大黃蜜蟲丸高、低劑量均可抑制血管壁CD40L的表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1大黃蜜蟲丸主要通過降低甘油三酯、低密度脂蛋白，升高高密度脂蛋白發(fā)揮調(diào)節(jié)血脂作用，且存在劑量依賴性。
　　 2大黃(?)蟲丸可調(diào)節(jié)NO/ET平衡，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能。
　　 3大黃蜜蟲丸可減少TNF-a等炎癥因子釋放，抑