鱉甲煎丸調(diào)節(jié)血脂防治動(dòng)脈粥樣硬化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：高脂血癥（HLP）是動(dòng)脈粥樣硬化（AS）、心腦血管疾病和脂肪肝發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。正常人群HLP發(fā)病率為20％～30％，并呈逐年增高及年輕化趨勢(shì)。有效控制HLP是預(yù)防心腦血管疾病的關(guān)鍵。本研究根據(jù)中醫(yī)謹(jǐn)守病機(jī)，異病同治的原則，采用高脂飼喂法復(fù)制大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型，觀察鱉甲煎丸不同劑量調(diào)節(jié)血脂及抗動(dòng)脈粥樣硬化的藥效及作用機(jī)制。
　　 方法：⑴建立飼喂基礎(chǔ)飼料的大鼠40只，常規(guī)觀察一周隨機(jī)分5組，每組8只，對(duì)照組、模型組

2、、鱉甲煎丸高劑量組、鱉甲煎丸低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組。除對(duì)照組給與基礎(chǔ)飼料外，其余各組飼喂高脂飼料（配方1％膽固醇、0.35％膽酸、5％煉制豬油、0.1％丙硫氧嘧啶及基礎(chǔ)飼料）的大鼠按70萬(wàn)單位vitD3/kg的總劑量分3天腹腔注射，對(duì)照組同時(shí)給予等體積的生理鹽水腹腔注射，連續(xù)觀察21天后，模型組：每天灌胃蒸餾水（1ml/100g）；鱉甲煎丸低劑量組：鱉甲煎丸混懸液1g生藥/kg灌胃；鱉甲煎丸高劑量組：鱉甲煎丸混懸液2g生藥/kg灌胃；陽(yáng)性

3、對(duì)照組：血脂康混懸液0.3 g/kg灌胃。⑵實(shí)驗(yàn)結(jié)束后大鼠斷頭取血，低溫離心，3000r/min；15min分離血清，血脂中的總膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C），低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）采用酶法；一氧化氮（NO）采用硝酸還原法；內(nèi)皮素（ET）采用放射免疫法；丙二醛（MDA）采用硫代巴比妥酸比色法；超氧化物岐化酶（SOD）采用黃嘌呤氧化酶法；腫瘤壞死因子（TNF-α）用放射免疫平衡法測(cè)定。處死大鼠

4、并立即刨取主動(dòng)脈弓，剝離外膜附著組織，一部分置于10％福爾馬林固定，石蠟切片，用于HE染色、免疫組化染色，分別觀察病理變化和主動(dòng)脈壁細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）的表達(dá)水平。一部分置于70％乙醇中，待流式細(xì)胞儀檢測(cè)平滑肌細(xì)胞的增殖周期和內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）。⑶采用SPSS11.0forwindows統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。數(shù)據(jù)用±s表示，采用組間對(duì)照方差分析法。
　　 結(jié)果：①鱉甲煎丸對(duì)大鼠血清血脂的影響模型組血清TG

5、、TC、LDL-C含量較對(duì)照組明顯升高（P<0.01，P<0.05），血清HDL-C明顯降低（P<0.05），表明模型組出現(xiàn)血脂異常。血脂康組TG、TC、LDL-C含量較模型組明顯降低（P<0.05）；鱉甲煎丸低劑量組與模型組對(duì)比TG、LDL-C明顯降低，有顯著性差異（P<0.05），與血脂康組對(duì)比，其降低TC作用不及血脂康組；鱉甲煎丸高劑量組與模型組對(duì)比TG、TC、LDL-C明顯降低（P<0.01，P<0.05），HDL-C含量明顯升

6、高，有顯著性差異（P<0.01），與血脂康組對(duì)比HDL-C明顯升高，有顯著性差異（P<0.05）。這表明鱉甲煎丸高、低劑量均有調(diào)節(jié)血脂的作用，且鱉甲煎丸高劑量較低劑量作用更明顯。②鱉甲煎丸對(duì)大鼠血清一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素（ET）的影響模型組血清NO水平較對(duì)照組顯著降低（P<0.05），ET水平明顯升高（P<0.05）；血脂康組與模型組比較NO水平升高，ET降低有顯著性差異（P<0.05）；鱉甲煎丸低劑量組與模型組對(duì)比NO水平升高，ET

7、水平降低，有顯著性差異（P<0.05）；鱉甲煎丸高劑量組與模型組對(duì)比NO顯著升高，ET水平明顯降低（P<0.01，P<0.05）；鱉甲煎丸高、低劑量組與血脂康組對(duì)比均無(wú)顯著性差異，但其作用趨勢(shì)為鱉甲煎丸高劑量組>血脂康組>鱉甲煎丸劑量組。③鱉甲煎丸對(duì)血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的影響模型組血清SOD活力較對(duì)照組明顯降低（P<0.05），MDA含量明顯升高（P<0.01）；血脂康組較模型組SOD水平明顯升高，MDA含量降

8、低，有顯著性差異（P<0.05）；鱉甲煎丸低劑量組與模型組對(duì)比血清SOD活力升高（P<0.05），與血脂康組對(duì)比SOD活力降低，有顯著性差異（P<0.05）；鱉甲煎丸高劑量組與模型組對(duì)比血清SOD活力顯著升高（P<0.01），MDA含量降低（P<0.05）；與血脂康組對(duì)比無(wú)顯著性差異。④鱉甲煎丸對(duì)ICAM-1表達(dá)的影響與正常組相比，模型組ICAM-1的含量顯著增加（P<0.01）；血脂康組ICAM-1的含量顯著低于模型組（P<0.01）

9、；高、低鱉甲煎丸劑量組與模型組相比ICAM-1的含量顯著降低（P<0.05）。表明鱉甲煎丸高、低劑量均可抑制血管壁ICAM-1的表達(dá)，且隨著劑量增加作用增強(qiáng)。鱉甲煎丸高、低劑量組與血脂康組對(duì)比均無(wú)顯著性差異，但其作用趨勢(shì)為鱉甲煎丸高劑量組>鱉甲煎丸低劑量組>血脂康組。⑤鱉甲煎丸對(duì)VEGF表達(dá)的影響模型組主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高，血脂康組、鱉甲煎丸低劑量組、鱉甲煎丸高劑量組VEGF的表達(dá)較模型組明顯降低

10、（P<0.05）；但血脂康組、鱉甲煎丸低劑量組、鱉甲煎丸高劑量組VEGF的表達(dá)無(wú)顯著性差異。⑥鱉甲煎丸對(duì)平滑肌細(xì)胞的增殖周期的影響模型組較對(duì)照組G0/G1期百分比明顯降低，而S期和G2/M期明顯升高，其增殖率為23％，說(shuō)明動(dòng)脈粥樣硬化時(shí)SMC分裂加速，增殖明顯。鱉甲煎丸低劑量組較模型組G0/G1期比率升高，S期比率降低；鱉甲煎丸高劑量較模型組G0/G1期明顯升高，而S期和G2/M期比率明顯降低，且兩治療組的細(xì)胞增殖率顯著低于模型組。血脂

11、康組較模型組G0/G1期比率升高，S期和G2/M期比率降低。⑦鱉甲煎丸對(duì)TNF-α的影響模型組較對(duì)照組血清中的TNF-α顯著增高（p<0.05），證實(shí)炎癥存在于AS過(guò)程中。血脂康組、鱉甲煎丸低劑量組、鱉甲煎丸高劑量組與模型組相比血清中的TNF-α顯著降低（p<0.05），血脂康組、鱉甲煎丸低劑量組、鱉甲煎丸高劑量組中血清TNF-α水平無(wú)明顯差別。提示該藥可以抑制炎癥反應(yīng)。⑧動(dòng)脈病理檢查：正常對(duì)照組：光鏡下組織學(xué)切片示正常主動(dòng)脈壁、內(nèi)膜、

12、中膜、外膜均清晰可見(jiàn)，各層結(jié)構(gòu)正常。無(wú)脂質(zhì)沉積改變，彈力纖維分布均勻。模型組：光鏡下，主動(dòng)脈壁內(nèi)膜顯著增厚向管腔突起，病灶表面由纖維細(xì)胞、膠原纖維構(gòu)成纖維帽，其下方有脂質(zhì)、少許炎細(xì)胞，可見(jiàn)粥樣斑塊形成，為脂質(zhì)、壞死物及膽固醇結(jié)晶及鈣化顆粒物。血脂康組：光鏡下主動(dòng)脈內(nèi)膜無(wú)明顯增厚，平滑肌細(xì)胞排列較規(guī)整。未見(jiàn)膽固醇結(jié)晶，亦未見(jiàn)溶解壞死組織。鱉甲煎丸低劑量組：光鏡下主動(dòng)脈內(nèi)膜稍有增厚，病灶可見(jiàn)泡沫細(xì)胞圓形體積大，胞質(zhì)內(nèi)大量空泡，符合AS癥的早

13、期改變。鱉甲煎丸高劑量組光鏡下主動(dòng)脈內(nèi)膜無(wú)明顯增厚，平滑肌細(xì)胞排列較規(guī)整，但可見(jiàn)輕度水腫。未見(jiàn)膽固醇結(jié)晶，亦未見(jiàn)溶解壞死組織。
　　 結(jié)論：⑴鱉甲煎丸降低血清TC、TG、LDL-C，提高HDL-C的含量，具有調(diào)節(jié)血脂的作用。⑵鱉甲煎丸可以使血清MDA的含量降低，SOD的含量升高，具有抗氧化作用。⑶鱉甲煎丸可以使血清ET的含量降低，NO的含量升高，具有調(diào)節(jié)NO/ET平衡作用，使NO與ET基本處于平衡狀態(tài)。⑷鱉甲煎丸具有下調(diào)ICAM