在蠟狀芽胞桿菌中AHL內(nèi)酯酶對(duì)ZwA抗軟腐病的增強(qiáng)效果.pdf

1、雙效菌素（Zwittermicin A，簡(jiǎn)稱ZwA）是由蠟狀芽胞桿菌（Bacillus cereus）和蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis，簡(jiǎn)稱Bt）產(chǎn)生的一種新型廣譜的氨基多元醇類抗生素。該抗生素可抑制多種植物病原菌：對(duì)卵菌、藻類原生生物具有很高的抑菌活性，對(duì)很多革蘭氏陰性與陽性細(xì)菌也表現(xiàn)出一定的抑菌活性。 N—?；呓z氨酸內(nèi)酯（Acyl—homoserine Lactones，簡(jiǎn)稱AHLs）是廣泛

2、存在于革蘭氏陰性細(xì)菌群體感應(yīng)系統(tǒng)（Quorum—Sensing System，簡(jiǎn)稱QS系統(tǒng)）中的信號(hào)分子，該信號(hào)分子可在細(xì)胞內(nèi)外穿梭，參與多種病原菌致病基因的表達(dá)調(diào)控，當(dāng)該分子濃度達(dá)到一定閾值時(shí)，能夠啟動(dòng)病原菌致病基因的表達(dá)，酰基高絲氨酸內(nèi)酯酶（AHL內(nèi)酯酶）通過可以降解AHLs信號(hào)分子，減弱相關(guān)致病基因的表達(dá)從而達(dá)到抗病的效果。 本研究結(jié)合以上兩種物質(zhì)的不同抗病機(jī)理，將來自蘇云金芽胞桿菌中的AHL內(nèi)酯酶基因（aiiA）導(dǎo)入到Z

3、wA產(chǎn)量不同的蠟狀芽胞桿菌中，得到相應(yīng)的重組菌株。本研究從兩條途徑來提高AHL內(nèi)酯酶的作用效果：1．采用蘇云金芽胞桿菌殺蟲晶體蛋白基因cry3Aa的啟動(dòng)子來增強(qiáng)aiiA基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，構(gòu)建帶有pro3A—aiiA融合基因的重組質(zhì)粒pBMB686；2．利用蘇云金芽胞桿菌S—層蛋白表面展示技術(shù)將AHL內(nèi)酯酶這一胞內(nèi)蛋白帶到胞外并錨定在細(xì)胞表面，以與環(huán)境中的AHLs分子直接作用，提高其降解活性，構(gòu)建了同時(shí)帶有slh—aiiA和pro3A—

4、aiiA融合基因的重組質(zhì)粒pBMB0624，并且分別將pBMB686和pBMB0624兩個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到蠟狀芽胞桿菌當(dāng)中，比較其抗病效果。 實(shí)驗(yàn)表明，aiiA基因（pro3A—aiiA和slh—aiiA）均可在重組菌中正常表達(dá)，并且不影響受體菌ZwA的表達(dá)和產(chǎn)量；感病實(shí)驗(yàn)證明，同時(shí)表達(dá)ZwA和AHL內(nèi)酯酶的重組菌對(duì)于胡蘿卜軟腐歐文氏菌感染馬鈴薯所引起的病害的抗病效果比單獨(dú)含產(chǎn)ZwA或AHL內(nèi)酯酶的蠟狀芽胞桿菌的抗病效果有明顯增強(qiáng)。說