蘇云金芽胞桿菌伴胞晶體蛋白對(duì)豬蛔蟲作用效果的研究.pdf

1、蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)伴胞晶體是廣泛使用的微生物殺蟲劑 ,與化學(xué)農(nóng)藥相比較,由于其對(duì)脊柱動(dòng)物無(wú)毒性而選擇性地作用于害蟲、對(duì)環(huán)境無(wú)污染且能通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)應(yīng)用于農(nóng)作物而持久地發(fā)揮植物保護(hù)作用,這些毒素已被應(yīng)用于有機(jī)農(nóng)業(yè).近些年來(lái)的研究證實(shí),其對(duì)動(dòng)物寄生線蟲也有強(qiáng)效作用.尋找對(duì)豬蛔蟲敏感的Bt菌株并將其應(yīng)用于動(dòng)物臨床實(shí)踐是該研究的目的.有關(guān)Bt對(duì)豬蛔蟲的作用,國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道.豬蛔蟲卵在保濕防腐的

2、條件下,28℃培養(yǎng)28d,發(fā)育成感染性蟲卵.試驗(yàn)小鼠和豬在感染前后飼喂不加任何驅(qū)蟲藥物的飼料.每只小鼠一次經(jīng)口感染約4,000個(gè)蟲卵;每頭豬(40kg)經(jīng)口感染6×10<'5>個(gè)蟲卵.試驗(yàn)豬被成功地復(fù)制出了豬蛔蟲病,表現(xiàn)出了豬蛔蟲病的臨床癥狀;60d后對(duì)豬糞便進(jìn)行檢查,每克糞便中蟲卵數(shù)高達(dá)7,100個(gè),成功地復(fù)制出來(lái)豬蛔蟲病理模型.該試驗(yàn)成功地在體外分離到了豬蛔蟲第二期幼蟲、第三期幼蟲和第四期幼蟲,為以后的實(shí)驗(yàn)打了良好的基礎(chǔ).試驗(yàn)小鼠在

3、感染后第6d迫殺取肺臟,收集第四期幼蟲(L4),用DMEM培養(yǎng)基配制成懸浮液,并定量至200~250條L4/ml.將Bt007、017、021、027、032、037、H<,14>和HD<,1>等八個(gè)菌株進(jìn)行培養(yǎng),提取伴胞晶體,堿溶提取蛋白質(zhì),測(cè)定晶體蛋白含量.根據(jù)以上結(jié)果,選擇017菌株大量培養(yǎng),提取伴胞晶體蛋白,測(cè)定蛋白含量;將晶體蛋白冷凍干燥,定量制成腸溶膠囊;腸溶膠囊經(jīng)口給豬投服,每日測(cè)定每克豬糞便中的豬蛔蟲卵數(shù),計(jì)算百分率(以

4、給藥前糞便中的蟲卵數(shù)為100﹪計(jì)),制作曲線并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,研究其對(duì)活豬體內(nèi)蛔蟲的作用效果.對(duì)豬TP、ALB、ALT、AST、ALP、CK-NAC、CR、CHOL、LDH-L、Glu、Urea等十一項(xiàng)臨床生物化學(xué)指標(biāo)研究顯示,該伴胞晶體蛋白腸溶膠囊對(duì)豬血液生化指標(biāo)的改變不顯著(P>0.05),未見有任何臨床癥狀,懷孕母豬沒(méi)有出現(xiàn)流產(chǎn)征兆,后期跟蹤無(wú)不良反應(yīng),說(shuō)明其對(duì)豬的心功能、肌肉、肝臟、腎臟、消化吸收、代謝及繁殖等沒(méi)有顯著影響,沒(méi)有誘