四種雞柔嫩艾美耳球蟲免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗免疫保護(hù)效果比較.pdf

1、雞球蟲病是一種病原寄生在細(xì)胞內(nèi)的原蟲疾病，給養(yǎng)禽業(yè)所帶來的經(jīng)濟(jì)損失極為嚴(yán)重。目前，應(yīng)用藥物防治遇到了球蟲耐藥性和藥物殘留的問題，大大限制了養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展，球蟲防治需要尋求新的途徑。實(shí)踐證明，激發(fā)宿主細(xì)胞免疫反應(yīng)來防治雞球蟲病是更有效的途徑之一。作為第三代疫苗的DNA疫苗的一個(gè)顯著優(yōu)勢(shì)是刺激機(jī)體產(chǎn)生廣泛的細(xì)胞免疫反應(yīng)和持久的免疫記憶，尤其應(yīng)用特定的球蟲保護(hù)性抗原聯(lián)合一些細(xì)胞因子，構(gòu)建調(diào)節(jié)型DNA疫苗，在球蟲病防治中具有誘人的應(yīng)用前景。為此我們

2、選擇球蟲的抗原TA4、MZ5-7、SO7、pEtK2基因與雞細(xì)胞因子IFN-Y基因，通過DNA重組技術(shù)將球蟲的抗原基因分別和雞細(xì)胞因子基因IFN-Y串聯(lián)為一體，插入到相關(guān)真核表達(dá)載體當(dāng)中，分別構(gòu)建了pVAX1.0-11A4-IFN-γ、pVAX1.0-MZ5-7-IFN-Y、pVAX1.O-SO7-IFN-γ、pVAX1.0-pEtK2-IFN-Y四種免疫調(diào)節(jié)型核酸疫苗和pVAX1.0-TA4、pVAX1.0-MZ5-7、pVAX1.0

3、-S07、pVAX1.0-pEtK2四種基因疫苗，同時(shí)進(jìn)行動(dòng)物免疫保護(hù)性試驗(yàn)比較這些DNA疫苗的免疫保護(hù)效果。設(shè)計(jì)特異性引物，利用本實(shí)驗(yàn)室克隆構(gòu)建的pMD18-T-TA4、pMD18-T-MZ5-7、pMD18-T-SO7、pMD18-T-pETK2、pMDl8-T-IFN-γ對(duì) E tenella球蟲基因TA4、MZ5-7、SO7、pEtK2、和雞IFN-Y基因進(jìn)行改造，以便于構(gòu)建核酸疫苗。用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建好的球蟲 E tenella

4、TA4、MZ5-7、SO7、pEtK2原核表達(dá)載體pET28b-TA4、pET28b-MZ5-7、pET32a(＋)-SO7、pET-28a(＋)-pEtK2進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，并對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行純化后注射大鼠，制備大鼠 E Tenella TA4、SO7、pEtK2蛋白抗血清。將制備的TA4、S07、pEtK2蛋白血清用于TA4、SO7、pEtK2基因疫苗在體內(nèi)蛋白表達(dá)的檢測(cè)；用大鼠子孢子抗血清檢測(cè)MZ5-7基因疫苗在體內(nèi)的表達(dá)。用特異性引物

5、對(duì)TA4、MZ5-7、S07、pEtK2基因疫苗在體內(nèi)表達(dá)進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)。結(jié)果表明構(gòu)建的基因疫苗在體內(nèi)能很好地轉(zhuǎn)錄表達(dá)，可用于動(dòng)物保護(hù)性實(shí)驗(yàn)研究。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為pVAX1.0-TA4-IFN-γ組、pVAX1.O-MZ5-7-IFN-γ組、pVAX1.0-SO7-IFN-γ組、pVAX1.0-pEtK2-IFN-γ組、pVAX1.0-TA4組、pVAX1.0-MZ5-7組、pVAX1.0-S07組、pVAX1.0-pEtK2組、非感

6、染非免疫組、感染非免疫組以及TA4蛋白組、pEtK2蛋白組。每組30只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雞。制備好的基因疫苗和蛋白疫苗經(jīng)肌肉于14日齡、21日齡兩次注射雛雞，28日齡經(jīng)口接種新鮮的柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊。35日齡撲殺，分別作盲腸病變記分、克盲腸糞便卵囊數(shù)(OPG)、增重、綜合抗球蟲指數(shù)(ACI)幾個(gè)指標(biāo)測(cè)定，確定其保護(hù)力的大小。結(jié)果表明，帶有Ch IFN-γ的E.tenella免疫調(diào)節(jié)型核酸疫苗保護(hù)效果比相對(duì)應(yīng)的核酸疫苗和蛋白疫苗好。構(gòu)建的E.