四種雞柔嫩艾美耳球蟲免疫調節(jié)型DNA疫苗免疫保護效果比較.pdf

1、雞球蟲病是一種病原寄生在細胞內的原蟲疾病，給養(yǎng)禽業(yè)所帶來的經濟損失極為嚴重。目前，應用藥物防治遇到了球蟲耐藥性和藥物殘留的問題，大大限制了養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展，球蟲防治需要尋求新的途徑。實踐證明，激發(fā)宿主細胞免疫反應來防治雞球蟲病是更有效的途徑之一。作為第三代疫苗的DNA疫苗的一個顯著優(yōu)勢是刺激機體產生廣泛的細胞免疫反應和持久的免疫記憶，尤其應用特定的球蟲保護性抗原聯(lián)合一些細胞因子，構建調節(jié)型DNA疫苗，在球蟲病防治中具有誘人的應用前景。為此我們

2、選擇球蟲的抗原TA4、MZ5-7、SO7、pEtK2基因與雞細胞因子IFN-Y基因，通過DNA重組技術將球蟲的抗原基因分別和雞細胞因子基因IFN-Y串聯(lián)為一體，插入到相關真核表達載體當中，分別構建了pVAX1.0-11A4-IFN-γ、pVAX1.0-MZ5-7-IFN-Y、pVAX1.O-SO7-IFN-γ、pVAX1.0-pEtK2-IFN-Y四種免疫調節(jié)型核酸疫苗和pVAX1.0-TA4、pVAX1.0-MZ5-7、pVAX1.0

3、-S07、pVAX1.0-pEtK2四種基因疫苗，同時進行動物免疫保護性試驗比較這些DNA疫苗的免疫保護效果。設計特異性引物，利用本實驗室克隆構建的pMD18-T-TA4、pMD18-T-MZ5-7、pMD18-T-SO7、pMD18-T-pETK2、pMDl8-T-IFN-γ對 E tenella球蟲基因TA4、MZ5-7、SO7、pEtK2、和雞IFN-Y基因進行改造，以便于構建核酸疫苗。用本實驗室構建好的球蟲 E tenella

4、TA4、MZ5-7、SO7、pEtK2原核表達載體pET28b-TA4、pET28b-MZ5-7、pET32a(＋)-SO7、pET-28a(＋)-pEtK2進行誘導表達，并對表達蛋白進行純化后注射大鼠，制備大鼠 E Tenella TA4、SO7、pEtK2蛋白抗血清。將制備的TA4、S07、pEtK2蛋白血清用于TA4、SO7、pEtK2基因疫苗在體內蛋白表達的檢測；用大鼠子孢子抗血清檢測MZ5-7基因疫苗在體內的表達。用特異性引物

5、對TA4、MZ5-7、S07、pEtK2基因疫苗在體內表達進行RT-PCR檢測。結果表明構建的基因疫苗在體內能很好地轉錄表達，可用于動物保護性實驗研究。實驗動物分為pVAX1.0-TA4-IFN-γ組、pVAX1.O-MZ5-7-IFN-γ組、pVAX1.0-SO7-IFN-γ組、pVAX1.0-pEtK2-IFN-γ組、pVAX1.0-TA4組、pVAX1.0-MZ5-7組、pVAX1.0-S07組、pVAX1.0-pEtK2組、非感

6、染非免疫組、感染非免疫組以及TA4蛋白組、pEtK2蛋白組。每組30只實驗動物雞。制備好的基因疫苗和蛋白疫苗經肌肉于14日齡、21日齡兩次注射雛雞，28日齡經口接種新鮮的柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊。35日齡撲殺，分別作盲腸病變記分、克盲腸糞便卵囊數(shù)(OPG)、增重、綜合抗球蟲指數(shù)(ACI)幾個指標測定，確定其保護力的大小。結果表明，帶有Ch IFN-γ的E.tenella免疫調節(jié)型核酸疫苗保護效果比相對應的核酸疫苗和蛋白疫苗好。構建的E.