氨氣刺激對(duì)仔豬呼吸道粘液分泌的影響.pdf

1、呼吸道粘液可黏附吸入的有害氣體、粉塵和病原體，通過(guò)上皮纖毛的擺動(dòng)，將有害物質(zhì)排出體外，對(duì)維持呼吸道的健康至關(guān)重要。粘液分泌過(guò)多是多種呼吸道疾病的共同特征。冬季豬舍內(nèi)氨氣濃度較高，不僅影響豬的生長(zhǎng)性能，還可能誘發(fā)呼吸道疾病。本研究首先采集健康豬的氣管及右肺上葉，通過(guò)組織切片染色觀察了豬呼吸道上皮的主要細(xì)胞類型（杯狀細(xì)胞、基細(xì)胞和克拉拉細(xì)胞）和粘液在氣管和支氣管的分布規(guī)律。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行氨氣刺激試驗(yàn)，選取7周齡健康仔豬12頭，隨機(jī)分為4組(

2、NC組，D4組，D8組，D12組)，每組3頭，人工模擬濃度為56mg/m3的氨氣環(huán)境，NC組為對(duì)照組，不刺激，D4、D8、D12組分別連續(xù)刺激4天、8天、12天，每天刺激8小時(shí)。刺激結(jié)束后采集各組仔豬的右肺上葉，進(jìn)行切片染色，觀察氨氣刺激對(duì)仔豬呼吸道粘液分泌的影響;同時(shí)采集左肺下葉提取RNA，對(duì)與粘液分泌和炎癥相關(guān)基因的表達(dá)量進(jìn)行了檢測(cè)。具體結(jié)果如下:
　　1.豬呼吸道主要上皮細(xì)胞的分布規(guī)律
　　分別對(duì)基細(xì)胞和克拉拉細(xì)胞的標(biāo)

3、記蛋白K14和SCGB1A1進(jìn)行免疫組化，證明具有分化潛能的基細(xì)胞和克拉拉細(xì)胞分布在豬的呼吸道上皮，在氣管上皮的含量比較豐富;對(duì)杯狀細(xì)胞的標(biāo)記蛋白MUC5AC進(jìn)行免疫組化，證明分泌粘液的杯狀細(xì)胞廣泛分布在豬的呼吸道上皮。
　　2.氨氣刺激對(duì)仔豬呼吸道粘液分泌的影響
　　AB-PAS染色發(fā)現(xiàn)隨著呼吸道管徑的變小，呼吸道粘液的含量逐漸減少至消失。對(duì)試驗(yàn)仔豬管徑一致的呼吸道進(jìn)行AB-PAS染色，發(fā)現(xiàn)呼吸道上皮粘液含量隨氨氣刺激時(shí)間

4、的延長(zhǎng)而增加，刺激12天后，呼吸道上皮粘液含量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);免疫組化試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)氨氣刺激后仔豬呼吸道上皮粘蛋白MUC5AC的含量增加。
　　3.氨氣刺激對(duì)呼吸道主要上皮細(xì)胞含量及相關(guān)因子表達(dá)的影響
　　(1)對(duì)基細(xì)胞的分子標(biāo)記K5、K14和TP63的含量進(jìn)行檢測(cè)，免疫熒光試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)氨氣刺激后仔豬呼吸道上皮K14的含量高于對(duì)照組;Q-PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，氨氣刺激后仔豬肺組織中K5、K14、TP63的表達(dá)量

5、都有增加的趨勢(shì)。
　　(2)對(duì)克拉拉細(xì)胞的標(biāo)記蛋白SCGB1A1進(jìn)行免疫組化，發(fā)現(xiàn)氨氣刺激前后仔豬的呼吸道上皮都存在少量的克拉拉細(xì)胞;Q-PCR結(jié)果顯示氨氣刺激12天后肺組織中SCGB1A1的表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　(3)對(duì)具有分化能力的Ⅱ型肺泡細(xì)胞的標(biāo)記基因ABCA3和與呼吸道粘液分泌相關(guān)基因S100A9、AQP5和EGFR進(jìn)行Q-PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示氨氣刺激后仔豬肺組織中ABCA3的表達(dá)量顯著高于對(duì)照

6、組(P＜0.05);與NC組相比，氨氣刺激12天后S100A9的表達(dá)量顯著升高(P＜0.05); AQP5的表達(dá)量在氨氣刺激4天后有下降的趨勢(shì);EGFR的表達(dá)量在氨氣刺激8天后有升高的趨勢(shì)。
　　結(jié)論:杯狀細(xì)胞、基細(xì)胞和克拉拉細(xì)胞廣泛分布在豬的呼吸道上皮，隨著呼吸道管徑的減小，粘液分泌逐漸減少至消失。氨氣刺激導(dǎo)致仔豬呼吸道上皮粘液增多，杯狀細(xì)胞增生，具有分化潛能的基細(xì)胞、Ⅱ型肺泡細(xì)胞含量增多，克拉拉細(xì)胞含量下降，與炎癥和粘液分泌相