羊肌細胞生成素（MyoG）基因的克隆及其多態(tài)性的分析.pdf

1、本研究從影響肉羊產肉性能的肌細胞生成素(MyoG)基因出發(fā)，利用GenBank中其它物種的序列信息，通過序列比對、分析和PCR-SSCP方法，對尚未報道的羊MyoG基因部分序列進行擴增、克隆、測序及PCR-SSCP多態(tài)性分析。方法：1、在GenBank中查找羊MyoGmRNA序列和豬、人、鼠的MyoG基因序列，運用DNAStar軟件對這些序列進行同源性分析。依據(jù)同源性較高外顯子區(qū)域設計引物。首先提取羊血液基因組DNA，采用PCR技術擴增

2、3段羊MyoG的部分序列，將這些片段重組到PMD18-T載體中，雙酶切和PCR鑒定后測序，拼接后獲得1884bp的羊MyoG基因的部分序列。2、通過已獲得的MyoG基因在其外顯子處設計兩對引物，同樣采用PCR技術擴增其序列并進行PCR-SSCP多態(tài)性分析。研究結果表明：①首次成功地克隆了羊的肌細胞生成素基因的全部內含子。第一內含子為766bp，第二內含子為587bp。②通過序列分析，發(fā)現(xiàn)羊的已知MyoG基因序列核苷酸組成富含GC(58.

3、6％)，且外顯子GC含量為65.4％明顯高于內含子，并與其它物種包括牛、豬、人和鼠的外顯子序列同源比對，發(fā)現(xiàn)它們的同源性分別為99.2％、91.3％、89.4％和87.5％，表現(xiàn)出高度保守性。同時進行了序列的核苷酸其它分析，旨在為研究羊MyoG基因結構與調控以及該基因在羊生長發(fā)育過程中的作用機制提供基礎資料。③經PCR-SSCP分析，發(fā)現(xiàn)第一外顯子擴增片段對應的基因編碼區(qū)存在多態(tài)性，第二外顯子擴增片段對應的基因編碼區(qū)不存在多態(tài)性。已知M