中國(guó)藍(lán)莓枝枯病的病原學(xué)、分子檢測(cè)及防治技術(shù)研究.pdf

1、藍(lán)莓枝枯病是由葡萄座腔菌引起的枝干病害之一，在世界范圍內(nèi)藍(lán)莓產(chǎn)區(qū)廣泛發(fā)生，在田間引起藍(lán)莓枝條枯萎、木質(zhì)部壞死及植株死亡等癥狀。目前，枝枯病在我國(guó)主要藍(lán)莓產(chǎn)區(qū)已有發(fā)生報(bào)道，對(duì)中國(guó)藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展帶來(lái)嚴(yán)重危害，至今仍缺乏對(duì)病害癥狀、病原種類(lèi)、病害發(fā)生和防治等方面的系統(tǒng)研究。本文通過(guò)廣泛的田間病害調(diào)查及實(shí)驗(yàn)室研究，以藍(lán)莓枝枯病及其病原菌為研究對(duì)象，從病原菌的形態(tài)學(xué)特性、多基因的系統(tǒng)發(fā)育分析等方面，明確我國(guó)藍(lán)莓枝枯病的癥狀特點(diǎn)、病原種類(lèi)、致病性

2、及其地理分布規(guī)律;建立了藍(lán)莓枝枯病的快速分子檢測(cè)技術(shù);明確了病原菌的寄主范圍及生物學(xué)特點(diǎn)，初步建立了藍(lán)莓枝枯病的綜合防治措施。取得主要結(jié)果如下:
　　1.2014年至2015年，在我國(guó)東北地區(qū)、山東半島地區(qū)、東南地區(qū)和西南地區(qū)的9個(gè)省市區(qū)調(diào)查18個(gè)果園中藍(lán)莓枝枯病的發(fā)生和危害情況，發(fā)現(xiàn)藍(lán)莓枝枯病已成為近年來(lái)我國(guó)藍(lán)莓栽培中的重要病害。共采集獲得藍(lán)莓枝枯病標(biāo)樣118份，經(jīng)組織分離獲得了69個(gè)葡萄座腔菌分離株。通過(guò)病原菌菌絲、分生孢子特

3、性結(jié)合真菌核糖體基因(rDNA-ITS)、微管蛋白基因（β-tubulin）和α延長(zhǎng)因子基因(EF1-α)多基因聯(lián)合的系統(tǒng)發(fā)育分析，明確了中國(guó)藍(lán)莓枝枯病是由:葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea、小新殼梭孢Neofusicoccum parvum和可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae組成，其中B.dothidea和N.parvum是優(yōu)勢(shì)種，分別占58％和39％，B.dothidea廣泛分布于各

4、個(gè)藍(lán)莓產(chǎn)區(qū)，N.parvum主要分布于夏季高溫多雨的南方地區(qū)，L.theobromae是中國(guó)藍(lán)莓寄主上首次報(bào)道的致病菌，僅在東南地區(qū)分布。室內(nèi)離體枝條及盆栽藍(lán)莓苗致病性試驗(yàn)表明，N.parvum和L.theobromae為強(qiáng)致病力病菌，B.dothidea致病性較弱。
　　2.采用常規(guī)PCR方法對(duì)藍(lán)莓枝枯病早期發(fā)病植株進(jìn)行快速分子檢測(cè)?；诠┰嚲甑暮颂求w基因和微管蛋白基因序列差異分析，設(shè)計(jì)并選擇了三對(duì)針對(duì)病原菌種的引物:引物L(fēng)t

5、347-F/R針對(duì)可可毛色二孢L.theobromae; Np304-F/R針對(duì)小新殼梭孢N.parvum; FaF/Bt2b針對(duì)葡萄座腔菌B.dothidea。三對(duì)引物組合可以分別在三種藍(lán)莓枝枯病菌的純培養(yǎng)物、人工接種藍(lán)莓植株和田間自然發(fā)病植株中檢測(cè)到特異性的PCR片段。三對(duì)引物無(wú)法檢測(cè)出其他藍(lán)莓枝干病原物如擬莖點(diǎn)霉屬Phomopsis spp.和擬盤(pán)多毛孢屬Pestalotiopsis spp.病原菌。這三對(duì)引物組合可以檢測(cè)到的病原

6、菌基因組DNA濃度范圍為100 pg到1 ng。本研究中的三對(duì)引物組合首次成功對(duì)三種藍(lán)莓葡萄座腔菌的純培養(yǎng)物和感病藍(lán)莓植株進(jìn)行了快速分子檢測(cè)，為病害早期發(fā)生的監(jiān)測(cè)預(yù)警及流行提供了技術(shù)支持。
　　3.系統(tǒng)研究了3種藍(lán)莓枝枯病菌的生物學(xué)特性及寄主范圍。通過(guò)采用不同溫度、營(yíng)養(yǎng)及pH值條件對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響的結(jié)果表明:B.dothidea、N.parvum和L.theobromae在10℃至35℃溫度范圍內(nèi)均可以生長(zhǎng)，在5℃條件下均無(wú)法生長(zhǎng)，

7、L.theobromae在40℃可以微弱生長(zhǎng)，且菌絲顏色變粉紅色，B.dothidea和N.parvum最適宜溫度為25℃，L.theobromae最適宜溫度為30℃。3種藍(lán)莓枝枯病菌對(duì)供試的碳源均可以利用，除了尿素之外的所有氮源也均可以利用，供試病原菌可以在pH值為4.0～10.0的PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，其中pH值為5.0～8.0時(shí)最適宜菌絲生長(zhǎng)。藍(lán)莓枝枯病菌L.theobromae、N.parvum和B.dothidea可以侵染我國(guó)蘋(píng)

8、果、梨樹(shù)、李樹(shù)、葡萄、桃樹(shù)等多種寄主果樹(shù)，并且來(lái)源于寄主蘋(píng)果以及藍(lán)莓的致病菌B.dothidea可以交互侵染。
　　4.通過(guò)2年的田間調(diào)查結(jié)合實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)，明確了藍(lán)莓枝枯病的侵染特點(diǎn)、初侵染源及發(fā)生條件:傷口是病原菌侵染的主要位點(diǎn)，田間的病株殘?bào)w是病害初侵染的主要來(lái)源，而且冬季可以在田間越冬;病害發(fā)生初期主要集中于花芽萌動(dòng)之后，但枝枯病在整個(gè)藍(lán)莓生長(zhǎng)季節(jié)均可以發(fā)生。采用室內(nèi)菌絲塊接種法評(píng)價(jià)了不同藍(lán)莓品種對(duì)枝枯病的抗病性，結(jié)果表明布里