林芝藏豬消化道寄生蟲調(diào)查及蛔蟲、細頸囊尾蚴線粒體基因組學研究.pdf

1、作為一種以草為主的地方特色品種，藏豬因?qū)Ω吆０蔚貐^(qū)嚴寒、缺氧等極端氣候具有極好的適應(yīng)能力而成為青藏高原牧民主要的食物來源和經(jīng)濟來源，其作用不可或缺。由于采取自由放牧的形式，粗放的管理模式，畜群結(jié)構(gòu)不合理以及藏豬品種的退化，再加上薄弱的疾病防控意識，因此近年來藏豬的各種疾病，尤其是寄生蟲疾病的發(fā)病率逐年升高。其中最為常見的寄生蟲是蛔蟲和細頸囊尾蚴，一旦發(fā)生感染，嚴重影響藏豬的生長發(fā)育和生產(chǎn)性能，不但給藏豬產(chǎn)業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失，同時也會提

2、高人類感染人畜共患寄生蟲疾病的風險。故本研究在西藏藏豬消化道寄生蟲病流行情況，蛔蟲和細頸囊尾蚴的分離和鑒定以及線粒體基因組學等方面展開調(diào)查和研究，結(jié)果如下:
　　1.西藏林芝地區(qū)藏豬消化道寄生蟲流行情況調(diào)查
　　采用寄生蟲學完全剖檢法、糞便蟲卵檢查法，112頭屠宰藏豬、73份糞便進行寄生蟲病流行情況調(diào)查。結(jié)果顯示:共檢測出寄生蟲11種，隸屬于5門、6綱、9目、10科、10屬，其中線蟲5種，絳蟲蚴2種，原蟲2種，吸蟲1種，棘頭

3、蟲1種。優(yōu)勢蟲種為細頸囊尾蚴(42.9％)、野豬后圓線蟲(38.4％)、棘球蚴(33.0％)、蛔蟲(30.4％)、肝片吸蟲(26.8％)、食道口線蟲(18.8％)、毛首線蟲(15.2％)、球蟲(15.1％)、結(jié)腸小袋纖毛蟲(6.8％)、蛭形巨吻棘頭蟲(5.6％)、六翼泡首線蟲(2.7％)。調(diào)查結(jié)果表明，林芝地區(qū)藏豬胃腸道寄生蟲感染普遍，感染率較高。
　　2.藏豬蛔蟲nad1、cox1和cox2基因擴增及序列分析
　　本試驗以

4、屠宰藏豬體內(nèi)分離的蛔蟲為研究對象，運用PCR方法，以不同引物分別擴增nad1、cox1和cox2三個基因序列，擴增后的片段純化后克隆至pGEM(@)-T Easy載體，轉(zhuǎn)化，并對擴增后陽性產(chǎn)物進行測序和序列分析，以鑒定藏豬蛔蟲的種類。結(jié)果顯示:藏豬蛔蟲的nad1、cox1和cox2序列均與豬蛔蟲（登錄號:X54253.1，豬蛔蟲）相似性為99％。調(diào)查結(jié)果表明，此次分離的蛔蟲屬于豬蛔蟲。本研究是首次通過藏豬蛔蟲三個線粒體基因片段nad1、

5、cox1、cox2進行分離、鑒定和分子標記。
　　3.藏豬細頸囊尾蚴病流行病學調(diào)查及cox2基因擴增及序列分析
　　本研究以西藏林芝地區(qū)屠宰藏豬體內(nèi)分離出來的細頸囊尾蚴為研究對象，用ELISA和PCR方法，首次擴增藏豬細頸囊尾蚴的cox2基因序列，并對擴增后陽性產(chǎn)物進行測序和序列分析，以鑒定藏豬蛔蟲的種類。結(jié)果顯示:藏豬細頸囊尾蚴的血清抗體陽性率平均為43.93％(2014:42.86％;2015:45.35％)，其中公豬和

6、母豬的陽性率分別為43.39％，44.56％，不同年齡段的藏豬細頸囊尾蚴的陽性率范圍為30.20％～63.79％，結(jié)果顯示:本次分離到細頸囊尾蚴株與甘肅、青海和四川分離株具有很大的相似性。本研究是首次通過對藏豬細頸囊尾蚴進行流行病學調(diào)查和cox2基因進行分離和鑒定，旨在為西藏地區(qū)藏豬細頸囊尾蚴的防治提供流行病學和分子生物學數(shù)據(jù)。
　　4.藏豬蛔蟲、細頸囊尾蚴線粒體基因組序列測定與分析
　　本試驗對藏豬蛔蟲、細頸囊尾蚴的線粒體

7、DNA進行提取、建庫和測序、功能注釋和生物信息學分析。結(jié)果表明:豬蛔蟲線粒體基因組大小為14128bp，編碼基因12個(cox1-3，nad1-6，nad4L，atp6，cytb)、rRNA2個(rrnL、rrnS)、tRNA35個;細頸囊尾蚴線粒體基因組大小為13607 bp，編碼基因12個(cox1-3，nad1-6，nad4L，atp6，cytb)、rRNA2個（rrnL，rrnS）、tRNA22個。豬蛔蟲、細頸囊尾蚴線粒體基因堿

8、基A、T含量明顯高于C、G含量，分別為71.74％和70.90％。豬蛔蟲、細頸囊尾蚴線粒體基因密碼子分別為4385（不含終止密碼子304個）和4194個（不含終止密碼子341個）。兩者密碼子種類均為63個，TTT使用最多，分別為15.51％和10.44％;蛔蟲最少的為CAA(0.05％)、CGC(0.05％)，細頸囊尾蚴最少的為CGC(0.05％)。均翻譯20種氨基酸，豬蛔蟲苯丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸比例最高，為17.13％、16.03％

9、、10.86％;細頸囊尾蚴為亮氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸比例最高，為16.48％、11.76％、11.06％。豬蛔蟲氨基酸比列最低的為谷氨酰胺(0.73％)、組氨酸(0.62％);細頸囊尾蚴氨基酸比列最低的為谷氨酰胺(1.29％)、色氨酸(1.67％)、丙氨酸(1.81％)。進化分析表明:藏豬蛔蟲與人蛔蟲（NC-016198.1）同源性高達99％;與X54253.1同源性高達99％;與中國湛江分離蟲體（登錄號為HQ704901.1）同源性為

10、98％。該結(jié)果與之前報道的人蛔蟲與豬蛔蟲高度同源結(jié)果一致，進一步證實了二者可能為同一種蟲體。藏豬細頸囊尾蚴與參考的甘肅分離株（登錄號:GQ228819.1）同源性均高達99％。
　　綜上所述，本研究通過對西藏藏豬消化道寄生蟲流行病學調(diào)查以及2種常見寄生蟲（蛔蟲、細頸囊尾蚴）進行線粒體基因組學研究，較為全面了解藏豬常見消化道寄生蟲的流行情況，并通過對其進行分離鑒定及線粒體基因組測序，這對于了解藏豬寄生蟲的分離鑒定、進化分析，種內(nèi)遺傳