河南省豬繁殖與呼吸綜合征流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是造成目前養(yǎng)豬業(yè)嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失的重要疾病之一。其病原是豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratoryvirus，PRRSV)，該病毒在臨床上引起母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、斷奶仔豬肺炎，生長遲緩及其他病原的繼發(fā)感染。鑒于目前尚缺乏河南省在本病流行病學(xué)及病原學(xué)等方面的系統(tǒng)的研究資料，本研究調(diào)

2、查了該病在河南的流行狀況，對其三間分布及其影響傳播的因素進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，探究了PRRSV的變異規(guī)律。本研究結(jié)果無疑將為河南省制定該病的防控規(guī)劃提供重要的參考依據(jù)。本文通過設(shè)計(jì)外側(cè)引物P1、P2，擴(kuò)增大小約402bp的片段，內(nèi)側(cè)引物P3、P4，擴(kuò)增大小約176bp的片段，擬建立檢測PRRSV的套式PCR方法；并應(yīng)用該方法對PRRSVMLV株、豬偽狂犬病病毒(PRV)、圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)、豬瘟病毒(CSFV)及空白對照進(jìn)行檢測

3、。結(jié)果顯示，除PRRSVMLV外，豬偽狂犬病病毒(PRV)、圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)、豬瘟病毒(CSFV)及空白對照的檢測結(jié)果均為陰性；將250μL細(xì)胞培養(yǎng)的PRRSVMLV病毒提取RNA后，依次稀釋成10-1～10-4，均能擴(kuò)增出明顯的目的條帶；且多次重復(fù)能得到一致的結(jié)果。表明本研究建立的套式PCR方法具有特異性強(qiáng)、敏感性高、重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。 對河南189個縣(市)進(jìn)行了PRRS的流行病學(xué)問卷調(diào)查。結(jié)果顯示，PRRSV免疫豬

4、場占38％；PRRS多發(fā)生在春、冬兩季及每年的7、8月份；發(fā)病豬群養(yǎng)殖類型主要為小規(guī)模養(yǎng)殖場及散養(yǎng)戶；發(fā)病豬的年齡主要為30～70日齡，約占41％，其次為2～30日齡，占39％，懷孕母豬占17％，其他占3％；臨床癥狀表現(xiàn)母豬繁殖障礙的占30％，表現(xiàn)仔豬呼吸道癥狀的占50％，母豬繁殖障礙－仔豬呼吸道癥狀的占30％，其他臨床表現(xiàn)的占10％。 對河南20個縣市163家豬場的送檢樣品采用本研究建立的套式PCR進(jìn)行PRRSV檢測。結(jié)果顯示

5、，其中18個縣市檢出PRRSV陽性，陽性檢出率為12.5％～100％，平均陽性率為34.4％。表明PRRS已成為危害當(dāng)?shù)仞B(yǎng)豬業(yè)的重要疫病。 通過對來自河南、福建、山東、浙江等不同省份的29株分離株采用PCR測序、DNAstar軟件進(jìn)行同源性分析，并與VR-2332、LV、BJ-4、CH-1a、HB-1、WSV等參考型株比較。結(jié)果顯示，河南本省PRRSVORF5基因序列間的同源性為95.0％～100％；與VR-2332、LV、BJ

6、-4、CH-1a、HB-1、WSV等參考型株的同源性為88.9％～90.2％、63.3％～64.2％、88.1％～89.4％、95％～96％、96.4％～97.2％、89.1％～90.9％；與福建、山東和浙江樣品同源性分別為88.1％～98.3％、96.2％～99.2％和95.7～99.0％。不同地域PRRSVORF5同源性分析表明，同一地域分離株間的同源性相對較高，基因亞群的分支有明顯的地域特征。提示病毒在自然環(huán)境中隨著時間的推移和當(dāng)

7、地自然環(huán)境及疫苗壓力作用下，沿著不同的方向進(jìn)化。對PRRSVORF5二級結(jié)構(gòu)預(yù)測圖譜進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)預(yù)測結(jié)構(gòu)圖譜存在顯著的差異。 對PRRSVORF5進(jìn)行限制性酶切，得到了三種酶切模式，兩種分離株的模式和一種疫苗株模式。且分離株的模式與疫苗株的模式明顯不同，即用MluⅠ酶能夠切開疫苗株ORF5的擴(kuò)增產(chǎn)物，而不能切開野毒株ORF5的擴(kuò)增產(chǎn)物。表明在PCR基礎(chǔ)上，應(yīng)用RFLP圖譜分析是進(jìn)行PRRSV分離株遺傳多樣性分析的快捷有效的工