博萊霉素致肺纖維化大鼠支氣管肺泡灌洗液中蛋白C系統(tǒng)的研究.pdf

1、目的:肺纖維化(pulmonary fibrosis,PF)是一種慢性間質(zhì)性肺病,早期病理改變?yōu)榉闻菅?隨著時(shí)間延長,纖維化逐漸加重,肺功能逐漸減退。預(yù)后非常差。有關(guān)間質(zhì)性肺疾病的病因及發(fā)病機(jī)制目前仍未闡明,近年來研究發(fā)現(xiàn),凝血系統(tǒng)的異常變化可能參與了間質(zhì)性肺疾病患者肺纖維化的過程。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察博萊霉素致肺纖維化大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白C(PC)、活化蛋白C-蛋白C抑制劑復(fù)合物(APC-PCI),血清中Ⅲ型前膠原(PCⅢ

2、)的含量,探討PC系統(tǒng)活性成分的變化及其對肺內(nèi)凝血活性的升高及肺纖維化形成的影響。
　　 方法:選擇體重230g±10g SD清潔級健康雄性大鼠(河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)48只,隨機(jī)分為博來霉素(BLM)組和生理鹽水對照組,每組各24只。博萊霉素組用10％水合氯醛(5mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉后,在無菌操作下作頸部正中切口,暴露氣管,經(jīng)穿刺向氣管內(nèi)注入博萊霉素(5mg/kg),于造模后3天、7天、14天、和28天各隨機(jī)處死6只。

3、對照組在同樣條件下以同樣方法向氣管內(nèi)注入等量的生理鹽水(1.25ml/kg),于造模后3天、7天、14天、28天各隨機(jī)處死6只。兩組動(dòng)物分別腹主動(dòng)、靜脈放血處死,收集血清保存到-70℃冰箱中待測Ⅲ型前膠原的含量。用4℃無菌生理鹽水對左肺行肺泡灌洗,離心后保存到-70℃冰箱中備用。測定支氣管肺泡灌洗液中蛋白C(PC)、活化蛋白C-蛋白C抑制劑復(fù)合物(APC-PCI)的含量。右肺下葉置于10％的中性福爾馬林中固定,行常規(guī)病理切片,HE染色,

4、觀察肺內(nèi)炎癥,Masson染色,觀察肺內(nèi)膠原,并進(jìn)行Szapiel病理分級,觀察肺泡炎和肺纖維化的動(dòng)態(tài)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)資料采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1大鼠支氣管肺泡灌洗液中蛋白C含量的變化:生理鹽水對照組各時(shí)間點(diǎn)灌洗液中的蛋白C含量間無顯著性差異(P＞0.05)。博萊霉素組BALF中蛋白C含量3天時(shí)下降,為3.966±0.684,7天時(shí)下降最為明顯,為1.423±0.799,與對照組比較均

5、有顯著性差異(P＜0.01),14天較7天有所升高,為5.085±0.728,與對照組比較亦有顯著性差異(P＜0.05),28天為6.031±0.574,與對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 2大鼠支氣管肺泡灌洗液中活化蛋白C-蛋白C抑制劑復(fù)合物(APC-PCI)含量的變化:生理鹽水對照組各時(shí)間灌洗液中活化蛋白C-蛋白C抑制劑復(fù)合物的含量間無顯著性差異(P＞0.05),博萊霉素組BALF中蛋白C含量3天時(shí)下降,為55

6、.855±8.555,7天時(shí)下降最明顯,為31.971±8.296,與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05,P＜0.01),14天較7天有所升高,為58.608±6.599,與對照組比較亦有顯著性差異(P＜0.05),28天為69.348±9.313,與對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3大鼠血清中Ⅲ型前膠原的含量的變化:生理鹽水對照組各時(shí)間點(diǎn)Ⅲ型前膠原的濃度間無顯著性差異(P＞0.05),博萊霉素組血清中Ⅲ型前

7、膠原含量3天時(shí)有所升高,為31.804±5.155,但與對照組比較無顯著性差異,7天時(shí)升高較明顯,為44.209±7.299,與對照組比較有顯著性差異(P＜0.01),14天較7天有所下降,為33.941±4.384,與對照組比較亦有顯著性差異(P＜0.05),28天降至約正常水平,為30.239±6.811,與對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 且Ⅲ型前膠原水平與活化蛋白C-蛋白C抑制劑復(fù)合物水平呈線性負(fù)相關(guān)(r=

8、-0.633,P＜0.01)。Ⅲ型前膠原水平與蛋白C水平亦呈線性負(fù)相關(guān)(r=-0.455,P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1肺間質(zhì)纖維化存在血液的高凝狀態(tài)。在肺泡炎期,支氣管肺泡灌洗液中的抗凝活性下降;在肺纖維化期,抗凝活性無明顯改變。即凝血活性的異常主要存在于肺泡炎階段。
　　 2肺內(nèi)凝血活性的改變與肺內(nèi)膠原代謝的活動(dòng)性及肺纖維化的形成相關(guān)。PC系統(tǒng)活性的下降及PCⅢ水平的升高提示PC途徑作用的減弱與凝血