博萊霉素致肺纖維化大鼠肺組織中TGF-β1,CTGF,IGF-1的表達(dá).pdf

1、目的：肺間質(zhì)纖維化(pumlonary interstitial fibrosis)是呼吸系統(tǒng)最嚴(yán)重的疾病之一，本病起病隱襲，可發(fā)生于任何年齡階段，多見(jiàn)于40～60歲之間的中老年人，臨床特征有咳嗽，少痰，活動(dòng)性呼吸困難，肺底部可聞及Velero噦音，X線胸片顯示兩肺彌漫性網(wǎng)狀結(jié)節(jié)影，肺功能檢查有限制性通氣功能障礙、彌散功能降低和肺的順應(yīng)性下降，最終可因呼吸衰竭而死亡。本病治療上缺乏有效的手段，確診后平均存活時(shí)間為2-5年。目前發(fā)病機(jī)制尚

2、未完全闡明，認(rèn)為可能與遺傳因素、吸煙、接觸粉塵或金屬、病毒感染、慢性反復(fù)的微量胃內(nèi)容物吸入、免疫異常、環(huán)境污染、藥物（如胺碘酮、博萊霉素等）和放射線等有關(guān)。大量研究結(jié)果證實(shí)細(xì)胞因子在肺纖維化發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用，在各種細(xì)胞因子中，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)在肺纖維化的形成過(guò)程中起重要作用。本文通過(guò)博萊霉素建立大鼠肺纖維化模型，觀察大鼠肺纖維化過(guò)程中肺組織的病理學(xué)改變，

3、測(cè)定肺纖維化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中大鼠肺組織中羥脯氨酸的含量變化，并應(yīng)用免疫組化的方法，測(cè)定在肺纖維化形成過(guò)程中TGF-β1、CTGF和IGF-1在肺組織中的表達(dá)情況，分析之間的關(guān)系，進(jìn)而探討肺纖維化的發(fā)生機(jī)制。
　　 方法：選取清潔級(jí)健康、雄性Sprague Dawley(SD)大鼠（購(gòu)自河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）48只，體重220±10g，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組(A組)和博萊霉素組(B組)，每組各24只。每組再按四個(gè)時(shí)間段(3、7、14、

4、28天)分別隨機(jī)分為四個(gè)小組，各小組均為6只SD大鼠。在無(wú)菌條件下操作，以10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉動(dòng)物后，作頸部正中切口，充分暴露氣管，用1ml注射器經(jīng)氣管軟骨環(huán)間隙刺入氣管，緩慢注入藥液(B組注入0.2～0.3ml含BLMA55mg/Kg的生理鹽水，A組注入生理鹽水0.2～0.3ml)，注后立即將動(dòng)物直立旋轉(zhuǎn)，使藥液在肺內(nèi)均勻分布。兩組動(dòng)物分別于造模后第3天、7天、14天、28天隨機(jī)處死6只大鼠，雙側(cè)股動(dòng)脈取血并心臟放血

5、處死動(dòng)物，取右肺中葉制成組織勻漿測(cè)定肺組織中羥脯氨酸含量。右肺下葉置于4％多聚甲醛溶液中固定，做石蠟切片，行HE染色評(píng)價(jià)肺泡炎、Masson膠原染色評(píng)價(jià)肺纖維化的程度，并按照Szapiel法分為4級(jí)。并用免疫組化方法檢測(cè)TGF-β1、IGF-Ⅰ和CTGF在模型組和對(duì)照組肺組織中的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。
　　 結(jié)果：
　　 1、B組（博萊霉素組）在3、7、14、28天肺泡炎程度均重于A組（正常

6、對(duì)照組），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；B組（博萊霉素組）在第3、7天肺纖維化程度與A組（正常對(duì)照組）比較，無(wú)明顯差異；在第14、28天時(shí)肺纖維化程度均明顯重于A組，有顯著差異，表明博萊霉素氣管內(nèi)注入復(fù)制肺纖維化大鼠模型成功，提示用博萊霉素復(fù)制肺纖維化模型仍是一種經(jīng)典的方法。
　　 2、肺組織羥脯氨酸(HYP)含量變化：B組（博萊霉素組）大鼠肺組織HYP含量隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高，在第3天時(shí)稍高于A組（正常對(duì)照組），但無(wú)明顯差異，第7、14

7、、28天時(shí)均高于A組（正常對(duì)照組），有顯著差異。
　　 3、免疫組化結(jié)果：模型組肺組織中TGF-β1、CTGF和IGF-1在3、7、14、28天的表達(dá)均高于正常對(duì)照組，各時(shí)間點(diǎn)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1、博萊霉素復(fù)制大鼠肺纖維化模型成功，此法操作簡(jiǎn)便，成功率高，是用于研究的良好模型。
　　 2、在博萊霉素誘導(dǎo)肺纖維化形成過(guò)程中，TGF-β1、CTGF、IGF-1在各時(shí)段肺組織中均有高水平

8、的表達(dá)，與正常對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明三者共同參與了肺纖維化的過(guò)程。
　　 3、直線相關(guān)性分析CTGF與TGF-β1相關(guān)系數(shù)r=0.782，IGF-Ⅰ與TGF-β1相關(guān)系數(shù)r=0.8，表明兩者分別與TGF-β1之間存在著相關(guān)性。CTGF、IGF-1與TGF-β1在肺纖維化的形成中可能存在著協(xié)同作用，對(duì)CTGF、IGF-1的抑制在肺纖維化的治療中可能更科學(xué)、有效。
　　 4、CTGF與羥脯氨酸含量之間的相關(guān)系數(shù)分別為r