暢肺防喘方對哮喘大鼠氣道重構(gòu)和炎癥介質(zhì)的影響的試驗研究.pdf

1、目的:暢肺防喘方是課題組多年來治療哮喘的經(jīng)驗方，應(yīng)用于臨床療效顯著，該方能有效緩解患者支氣管痙攣，提高患者生活質(zhì)量。其免疫作用已有初步探索。本課題擬在前期臨床觀察和實驗研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步從分子生物學(xué)和免疫學(xué)水平，研究暢肺防喘方防治哮喘的作用機(jī)制。本課題通過體外實驗，運用血清藥理學(xué)方法，研究該方對支氣管平滑肌細(xì)胞的抑制增殖作用；并通過體內(nèi)實驗，觀察該方對哮喘模型大鼠的平喘作用和對其支氣管、肺組織形態(tài)學(xué)的影響，研究其血液、肺泡灌洗液中EO

2、S(嗜酸性粒細(xì)胞)、IgE及相關(guān)趨化因子Eotaxin(嗜酸性粒細(xì)胞趨化蛋白)、ICAM-1(細(xì)胞間粘附分子-1)表達(dá)水平的變化。進(jìn)一步從細(xì)胞和分子生物學(xué)水平探討暢肺防喘方治療哮喘的作用機(jī)理，從而為開發(fā)臨床防治哮喘的有效中藥制劑奠定基礎(chǔ)。 方法: 1、體內(nèi)實驗方法：取大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和分類，對其上清液以雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法進(jìn)行細(xì)胞因子Eotaxin、ICAM-1含量的測定；血細(xì)

3、胞計數(shù)分類，放免法檢測血中IgE含量；制備大鼠支氣管及肺組織切片，HE染色，觀察氣道重構(gòu)情況；免疫組化法檢測肺及支氣管局部組織Eotaxin、ICAM-1的表達(dá)。 2、體外實驗方法：含藥血清制備；MTT酶標(biāo)法、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)法測支氣管平滑肌細(xì)胞的增殖水平，以了解該方對抗哮喘氣道重構(gòu)的作用。 結(jié)果: 1、體內(nèi)試驗： 1.1實驗結(jié)果顯示暢肺防喘方可顯著降低WBC數(shù)量，尤其是嗜酸性細(xì)胞(P＜0.01)，

4、說明該方可明顯改善呼吸道炎性癥狀。實驗結(jié)果還表明血清IgE的含量降低，說明其治療和預(yù)防作用可能是通過此途徑來實現(xiàn)的，為暢肺防喘方治療支氣管哮喘的臨床應(yīng)用提供了有力的實驗依據(jù)。 1.2 ELISA法結(jié)果顯示：與正常組比較模型組支氣管肺泡灌洗液中Eotaxin、ICAM-1均顯著升高，經(jīng)治療后，上述指標(biāo)均顯著降低。說明暢肺防喘方可顯著抑制哮喘大鼠Eotaxin、ICAM-1表達(dá)。前期研究表明，該方對EOS的抑制作用較為明顯。EOS浸

5、潤是哮喘炎癥的顯著病理生理特征，EOS向炎癥部位趨化、募集，是哮喘病癥中重要的病理過程，其過程機(jī)制與Eotaxin、ICAM-1等關(guān)系密切。結(jié)果提示，對Eotaxin、ICAM-1的抑制作用可能是暢肺防喘方治療哮喘的作用機(jī)制之一。 1.3肺組織病理切片HE染色顯示，抗原激發(fā)后模型組肺組織嗜酸性粒細(xì)胞和炎癥細(xì)胞浸潤與對照組相比有明顯增多(P＜0.01)。 2、體外實驗：本實驗發(fā)現(xiàn)暢肺防喘方高、中、小劑量組含藥血清對支氣管平

6、滑肌增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)的平均光密度明顯高于對照組(P＜0.05)，與地塞米松組無顯著性差異(P＞0.05)，它與MTT。法觀察結(jié)果一致。本次實驗證明，與對照組比較，暢肺防喘方高、中劑量含藥血清組能明顯抑制大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞(ASMC)的增殖，與地塞米松含藥血清組比較無顯著性差異，而暢肺防喘方小劑量含藥血清組則無明顯作用，考慮可能與藥物濃度有關(guān)。且隨著作用時間的延長，含藥血清對支氣管平滑肌細(xì)胞的抑制作用有增強(qiáng)趨勢。說明暢肺防

7、喘方可能通過抑制組胺(His)促ASMC增殖作用而達(dá)到防治哮喘的效果，且存在一定的劑量、時間依賴關(guān)系。 結(jié)論: 1、體內(nèi)實驗：證實了暢肺防喘方的平喘作用(癥狀改善，血中IgE、EOS，BALF中EOS含量下降，支氣管及肺形態(tài)學(xué)的變化)和作用機(jī)制(抑制趨化因子Eotaxin和粘附分子ICAM-1的表達(dá))。 2、體外實驗：運用血清藥理學(xué)方法證實了暢肺防喘方有較好的抗哮喘大鼠氣道重構(gòu)的作用(抑制支氣管平滑肌細(xì)胞增殖)和