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文檔簡介
1、目的:本研究通過檢測豚鼠哮喘模型血清中IL-4、TGF-β1水平和肺組織Rock2蛋白的表達探討:1、辛伐他汀對哮喘氣道炎癥及重塑的影響,為哮喘的臨床防治提供新的治療途徑。2、辛伐他汀干預哮喘氣道炎癥及重塑的可能機制。
方法:本實驗將50只健康雄性豚鼠(6周齡,體重250-300克)通過隨機數字表法將豚鼠分為5組,分別為:對照組、哮喘模型組、S1:20mg/kg辛伐他汀干預組、S2:40mg/kg辛伐他汀干預組、S3:60
2、mg/kg辛伐他汀干預組,每組10只。本實驗以OVA致敏和反復激發(fā)復制豚鼠哮喘模型。哮喘組和辛伐他汀干預組均用OVA致敏和激發(fā),而正常對照組豚鼠致敏和激發(fā)均使用等量生理鹽水代替OVA進行,余操作同哮喘組。三個辛伐他汀干預組除正常致敏激發(fā)外,每次于激發(fā)前30分鐘分別給予辛伐他汀20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg混懸液腹腔注射。末次激發(fā)24小時后,股動脈放血處死,然后收集血清、肺泡灌洗液(BALF)及肺組織,分別計算炎性細胞總數
3、、嗜酸性粒細胞總數,部分肺組織行病理切片、蘇木精-伊紅(HE)染色;用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清中IL-4、TGF-β的水平;免疫組織化學法檢測各組豚鼠肺組織中Rock2蛋白的表達,并進行定量分析。
結果:
1、成功建立豚鼠哮喘模型。
2、各組豚鼠BALF中細胞總數和EOS計數(×104/ml):哮喘組細胞總數、EOS計數(401.8±110.7,61.9±12.5)、S1(273.6
4、±33.1,27.8±9.1)、S2(207.9±35.8,18.4±7.3)、S3(199.3±28.6,28.6±10.7)均高于正常對照組(101.1±16.6,4.9±1.6)(P<0.01,P<0.01),辛伐他汀干預組細胞總數及嗜酸性粒細胞計數均明顯低于哮喘模型組(P<0.05),但高于正常對照組(P<0.05)。
3、病理切片結果:正常對照組肺組織結構正常完整,管腔規(guī)則無狹窄,氣道黏膜無水腫,周圍無炎癥細胞浸
5、潤,肺泡間隔完整正常。哮喘模型組可見大量炎性細胞浸潤,支氣管平滑肌增生肥厚,管壁增厚,管腔狹窄,肺泡間隔不均勻增厚。辛伐他汀干預組支氣管肺組織病理改變明顯輕于哮喘模型組。
4、血清ELISA法檢測IL-4、TGF-β1結果:與正常組(18.52±3.70,22.79±6.56)相比,哮喘模型組IL-4、TGF-β1水平(38.23±6.33,47.61±8.08)、S1組(28.62±5.58,38.96±6.38)、S2
6、組(23.69±4.08,30.46±8.61)、S3組(30.49±6.86,40.10±7.05)明顯增加(P<0.01)。其中,哮喘模型組明顯高于辛伐他汀干預組(P<0.05);S1、S3組高于S2組(P<0.05)。
5、免疫組織化學法測豚鼠氣道Rock2蛋白的表達,以陽性表達的平均光密度值為統計量:與正常對照組(0.078±0.011)相比,哮喘模型組(0.153±0.014)、S1組(0.121±0.017)、
7、S2組(0.097±0.021)、S3組(0.125±0.032)明顯增加,差異有統計學意義(P<0.05);哮喘模型組高于3個辛伐他汀干預組(P<0.05),S2組低于S1、S3組(P<0.05)。
6、直線相關性分析結果:肺組織Rock2蛋白的表達與血清中IL-4、TGF-β1水平均呈顯著正相關(r=0.533,P<0.05;r=0.622,P<0.01)。IL-4與TGF-β1水平呈正相關(r=0.625,P<0.0
8、5)。
結論:
1、通過抗原致敏和反復霧化激發(fā),可成功建立具有氣道炎癥和氣道重塑特征的豚鼠哮喘模型。
2、辛伐他汀可降低IL-4水平,調節(jié)Th1/Th2失衡,減輕氣道炎癥。辛伐他汀可降低TGF-β1水平,發(fā)揮抑制氣道重塑的作用。
3、哮喘模型組豚鼠氣道中Rock2蛋白表達明顯高于對照組,提示哮喘可能與Rho/Rock信號轉導通路的激活有關。辛伐他汀干預組氣道中Rock2蛋白表達均低
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