JNK3信號(hào)通路在缺血性腦損傷中作用的研究.pdf

1、腦中風(fēng)(缺血)是當(dāng)今社會(huì)主要疾病之一，缺血誘導(dǎo)的某些關(guān)鍵酶活性的改變參與了缺血性腦損傷的形成。大量的實(shí)驗(yàn)研究提示JNK激活在局灶和全腦缺血介導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。因此，JNK被認(rèn)為是腦缺血性疾病的治療靶點(diǎn)。本文采用S-D大鼠的四動(dòng)脈結(jié)扎全腦缺血模型，并利用含有JIP-1和JNK相互結(jié)合的結(jié)構(gòu)域的融合肽Tat-JBD和JNK小分子抑制劑SP600125闡明JNK3的激活在腦缺血再灌介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷中的重要作用，并著重探討了

2、JNK3介導(dǎo)的腦缺血性神經(jīng)元凋亡的下游信號(hào)通路。 1.JNK3的激活參與了腦缺血再灌介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷采用四動(dòng)脈結(jié)扎SD大鼠全腦缺血模型，于缺血前40分鐘或缺血后60分鐘腦室注射含有JIP-1蛋白中153-163段11個(gè)氨基酸的小肽(Tat-JBD)或于缺血前20分鐘或缺血后60分鐘腦室注射JNK小分子抑制劑SP600125，以免疫沉淀、免疫印跡方法研究蛋白間的相互結(jié)合及蛋白激酶的活性變化，以TUNEL和組織學(xué)方法觀察神經(jīng)細(xì)胞的凋

3、亡和死亡情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Tat-JBD通過(guò)阻斷JNK3-JIP-1復(fù)合物的形成從而抑制JNK3的激活，并在缺血前后給予都可減少腦缺血/再灌注誘導(dǎo)的海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的凋亡細(xì)胞數(shù)，提高神經(jīng)元的細(xì)胞存活數(shù)；SP600125通過(guò)抑制JNK3的激活而保護(hù)腦缺血/再灌注誘導(dǎo)的海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的損傷。總之，以上結(jié)果表明腦缺血/再灌注可以誘導(dǎo)JNK3的激活，并且JNK3的激活參與了腦缺血再灌介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷。 2.JNK3介導(dǎo)的腦缺血

4、性神經(jīng)元凋亡的下游信號(hào)通路采用四動(dòng)脈結(jié)扎SD大鼠全腦缺血模型，于缺血前40分鐘腦室注射Tat-JBD或缺血前20分鐘腦室注射SP600125，以免疫沉淀、免疫印跡以及免疫組化的方法研究蛋白間的相互結(jié)合及蛋白激酶的活性變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在海馬的CA1區(qū)，Tat-JBD和SP600125抑制腦缺血介導(dǎo)的JNK核底物c-Jun的磷酸化和Fasl的表達(dá)，而且SP600125抑制腦缺血介導(dǎo)的DP5的表達(dá)和DP5與Bcl-2的相互作用；另一方面，通過(guò)

5、抑制JNK非核底物Bcl-2的磷酸化和Bax從Bcl-2/Bax二聚體上釋放，Tat-JBD和SP600125阻止了腦缺血介導(dǎo)的Bax轉(zhuǎn)位于線粒體和細(xì)胞色素c從線粒體釋放到胞漿；另外，Tat-JBD還抑制腦缺血介導(dǎo)的Caspase3的激活?？傊?，以上結(jié)果表明，激活的JNK通過(guò)磷酸化其核底物c-Jun增加AP-1轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)了凋亡蛋白Fasl和DP5的表達(dá)，F(xiàn)asl結(jié)合其受體從而啟動(dòng)Fas介導(dǎo)的凋亡信號(hào)通路，DP5與Bcl-2結(jié)合抑制其

6、抗凋亡活性；另一方面，激活的JNK通過(guò)磷酸化其非核底物Bcl-2，以致促進(jìn)Bax從Bcl-2/Bax二聚體上釋放到線粒體外膜介導(dǎo)細(xì)胞色素c從線粒體釋放到胞漿，從而啟動(dòng)線粒體介導(dǎo)的凋亡信號(hào)通路。 綜上所述，腦缺血/再灌注誘導(dǎo)JNK3的激活，進(jìn)一步通過(guò)核通路和非核通路，最終導(dǎo)致海馬CA1神經(jīng)元凋亡。提示JNK3的激活在腦缺血再灌介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷中發(fā)揮了重要作用，并可作為腦缺血性疾病的治療靶點(diǎn)；并且Tat-JBD和SP600125具有