兔竇房結(jié)缺血-再灌注損傷及L-精氨酸的干預(yù)作用.pdf

1、竇房結(jié)(SAN)急、慢性缺血可致其器質(zhì)性病變、沖動(dòng)形成和傳導(dǎo)障礙，是心臟電生理活動(dòng)異常的主要因素之一，亦是發(fā)病率較高的病竇綜合征常見病因。由于竇房結(jié)體積小，功能單位少，細(xì)胞連接簡(jiǎn)單，血供豐富且多為單支血管供血，故極易受供血側(cè)冠狀動(dòng)脈病變的影響。一旦結(jié)實(shí)質(zhì)病變后，易致其機(jī)能障礙，恢復(fù)較困難。目前，有關(guān)普通心肌缺血-再灌注的研究十分廣泛。一些高效、高選擇性且不易產(chǎn)生耐藥性的一氧化氮載體類藥物已在臨床上用于防治多種心血管疾病。而對(duì)心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)

2、缺血-再灌注損傷與保護(hù)的認(rèn)識(shí)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。因此，研究竇房結(jié)缺血-再灌注結(jié)構(gòu)和功能的變化及發(fā)生機(jī)理，并探討內(nèi)、外源性因素對(duì)缺血-再灌注竇房結(jié)細(xì)胞的保護(hù)、修復(fù)機(jī)制具有重要的基礎(chǔ)理論和臨床應(yīng)用意義。 本文在竇房結(jié)在體器官水平和分離培養(yǎng)單細(xì)胞水平上，僅從組織形態(tài)學(xué)和電生理功能角度設(shè)計(jì)如下幾個(gè)方面的研究?jī)?nèi)容： 第一部分在體兔竇房結(jié)缺血再灌注損傷及L-精氨酸的干預(yù) 第一章兔在體竇房結(jié)缺血再灌注損傷動(dòng)物模型建立 目的：以手

3、術(shù)方式建立可靠的在體竇房結(jié)缺血再灌注動(dòng)物模型。 結(jié)論：此模型建立的關(guān)鍵是從胸骨正中開胸、右冠狀動(dòng)脈根部結(jié)扎，結(jié)合心電圖加以確認(rèn)，方法可靠，成功率高。 第二章兔右冠狀動(dòng)脈缺血再灌注致心律失常的演變及L-精氨酸干預(yù)作用 目的：觀察右冠狀動(dòng)脈缺血再灌注致心律失常的演變及L-Arg干預(yù)效果。 結(jié)論：補(bǔ)充適量的L-Arg具有抗心律失常作用；缺血期時(shí)間越長(zhǎng)，L-Arg抗再灌注心律失常作用越差。 第三章L-精氨

4、酸對(duì)兔右冠狀動(dòng)脈缺血再灌注時(shí)竇房結(jié)功能的影響 目的：觀察L-精氨酸對(duì)兔右冠狀動(dòng)脈缺血再灌注竇房結(jié)傳導(dǎo)時(shí)間(SACT)和恢復(fù)時(shí)間(SNRT)的影響。 結(jié)論：隨著缺血時(shí)間延長(zhǎng)SAN功能損傷加重；早期再灌注損傷敏感；組織內(nèi)適當(dāng)補(bǔ)充L-Arg，于缺血期和再灌早期對(duì)SAN電生理功能恢復(fù)是有益的，于再灌注后期可能加重?fù)p傷。 第四章缺血再灌注竇房結(jié)細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因bcl-2、bax和iNOS蛋白表達(dá)及L-精氨酸干預(yù)

5、目的：探討缺血再灌注竇房結(jié)細(xì)胞凋亡與其相關(guān)基因bcl-2、bax以及iNOS蛋白表達(dá)之間的關(guān)系，并評(píng)價(jià)L-Arg干預(yù)作用。 結(jié)論：①iNOS生成增多可能與缺血再灌注竇房結(jié)細(xì)胞凋亡密切相關(guān)；②補(bǔ)充適量L-Arg能減少細(xì)胞凋亡，可能與bcl-2表達(dá)上調(diào)和bax表達(dá)下調(diào)有關(guān)。 第五章缺血再灌注竇房結(jié)間質(zhì)膠原網(wǎng)絡(luò)的改建 目的：觀察缺血-再灌注竇房結(jié)膠原網(wǎng)架重構(gòu)與改建的形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)論：竇房結(jié)缺血再灌注致其間質(zhì)膠

6、原網(wǎng)絡(luò)重構(gòu)，必然影響到其沖動(dòng)的產(chǎn)生和傳遞，可能是病竇綜合征發(fā)病原因之一。 第二部分離體兔竇房結(jié)模擬缺血再灌注損傷及L-精氨酸的干預(yù) 第一章乳兔竇房結(jié)定位和細(xì)胞構(gòu)筑的光鏡觀察 目的：詳細(xì)觀察乳兔竇房結(jié)的位置、形態(tài)大小和細(xì)胞構(gòu)筑，為行竇房結(jié)的準(zhǔn)確取材提供充分的形態(tài)學(xué)資料。 結(jié)論：①位置特殊，取材時(shí)應(yīng)留足上腔靜脈近端；②細(xì)胞構(gòu)筑簡(jiǎn)單，起搏細(xì)胞含量高，細(xì)胞較幼稚，較適合竇房結(jié)細(xì)胞原代純化培養(yǎng)。 第二章乳兔

7、竇房結(jié)取材和純化培養(yǎng) 目的：為深入研究竇房結(jié)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和自律起搏的機(jī)制等提供獲取充足的竇房結(jié)單細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。 結(jié)論：細(xì)胞體積小，含量高，搏動(dòng)快的梭形細(xì)胞是起搏細(xì)胞。 第三章模擬缺血再灌注對(duì)乳兔竇房結(jié)培養(yǎng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷及L-精氨酸的干預(yù)效果 目的：觀察模擬缺血再灌注培養(yǎng)乳兔竇房結(jié)細(xì)胞損傷及L-精氨酸干預(yù)影響。 結(jié)論：①模擬缺血一定時(shí)間后可以誘導(dǎo)竇房結(jié)細(xì)胞凋亡，再灌注后細(xì)胞凋亡加重，甚至導(dǎo)致細(xì)胞壞

8、死；②模擬缺血/再灌注竇房結(jié)細(xì)胞與L-精氨酸共同孵育，可減輕細(xì)胞損傷。 第四章L-精氨酸對(duì)模擬缺血再灌注培養(yǎng)乳兔竇房結(jié)細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制 目的：檢測(cè)缺血/再灌注后SAN細(xì)胞內(nèi)SOD活性、MDA、NOS、NO含量變化，探討L-Arg對(duì)竇房結(jié)細(xì)胞保護(hù)的可能機(jī)制。 結(jié)論：①再灌注后細(xì)胞損傷較單純?nèi)毖?，可能與活性氧自由基生成較多有關(guān)；②補(bǔ)充NO合成底物L(fēng)-精氨酸具有清除自由基功效，增加SOD活力，減少氧自由基生成、阻斷