固相微萃?。⊿PME）測定生物樣品中揮發(fā)性有機物的應用研究.pdf

1、目的: 固相微萃取(SPME)是利用涂有吸附劑的熔融石英纖維吸附樣品中的有機物質而達到萃取濃縮的目的，具有無溶劑、可直接進樣、操作簡便快捷、靈敏的特點，克服了傳統(tǒng)的樣品前處理技術的缺點。SPME集取樣、萃取、富集和進樣于一體，操作簡便、分析周期短、樣品用量少、重現(xiàn)性好、易于自動化，特別適合現(xiàn)場分析，且不用或少量使用有機溶劑，既有利于分析人員的健康又免除了對環(huán)境的二次污染。本實驗將最新的SPME技術應用到職業(yè)衛(wèi)生生物監(jiān)測工作中，根

2、據SPME技術的原理，自主研制SPME裝置，著重研究固相微萃取技術中固相涂層的制作方法，篩選出適合于測定尿中丙酮、血中苯乙烯的固相涂層，研究制定測定尿中丙酮、血中苯乙烯的SPME檢測方法。擬將研究的方法申報為職業(yè)衛(wèi)生生物監(jiān)測標準方法，在全國職業(yè)衛(wèi)生技術服務部門應用。 方法: 1.SPME裝置的研制：根據SPME技術的基本原理自主研制了SPME裝置，SPME技術中固相涂層材料的選擇及制作工藝探討：根據有機物與溶劑間相似相容

3、原理，選擇適用于尿中丙酮、血中苯乙烯的固相涂層材料。通過改變涂層溶液濃度、涂布時間、涂布次數(shù)來改變涂層厚度，確定一個最適合上述代謝產物測定的涂層厚度及涂層涂布方法。 2.尿中丙酮、血中苯乙烯的SPME方法學研究：試樣量、容器體積、萃取時間、萃取溫度、攪拌方式及速率的選擇。 3.SPME與氣相色譜(GC)連用條件的選擇：包括柱類型、柱溫、進樣口溫度、檢測器溫度的選擇、解吸溫度、解吸時間的確定。 4.現(xiàn)場應用研究：選

4、擇接觸丙酮、苯乙烯等毒物的接毒工人進行方法學驗證，同時取空白樣品作對照。 結果: 1.自制SPME萃取裝置制作簡單、使用方便。適合尿中丙酮、血中苯乙烯的萃取涂層為PDMS涂層，涂層涂布3次，涂層溶液濃度50g/L，加入6％固化劑時，萃取效果較好，萃取時間適宜。用顯微鏡測得制成的PDMS涂層厚度為120μm。 2.尿中丙酮測定最優(yōu)SPME條件為無水硫酸鈉用量4克，萃取溫度為30℃，萃取時間為20min，轉速選擇為低

5、速，尿樣體積與頂空空間比例為1:3，解吸溫度為250℃，解吸時間為5min。尿中丙酮在0.0～150.0μg/mL，范圍內線性關系良好，方程式為Y=3.55X+3.05，相關系數(shù)r=0.9990，檢出限為0.0008μg/mL，方法精密度良好，回收率90.7％以上，尿樣可在室溫下和4℃冰箱中保存14天，環(huán)境可能存在的丙酮共存物二氯甲烷、2-丁酮、甲醇、乙酸乙酯及尿樣中基體均不干擾丙酮的測定。應用本方法測定了30名丙酮接觸者和10名丙酮非

6、接觸者尿中丙酮的含量。丙酮接觸者尿樣中丙酮含量范圍為0.04～62.97μg/mL，丙酮非接觸者尿樣中丙酮含量均小于檢出限。實驗結果表明SPME-GC法適用于尿中丙酮的測定。 3.血中苯乙烯測定最優(yōu)SPME條件為濃磷酸15μl/2毫升血樣，萃取溫度為20℃，萃取時間為10min，轉速選擇為中速，血樣體積/頂空空間比例為1:4，解吸溫度為250℃，解吸時間為5min。血中苯乙烯在0.00～1.65μg/mL范圍內線性關系良好，方程

7、式為Y=187.24X-2.10，相關系數(shù)r=0.9994，檢出限為0.0006gg/mL，方法精密度良好，回收率77.O％以上，血樣可在4℃冰箱和冷凍條件下一8℃下均可保存14天，環(huán)境可能存在的苯乙烯共存物苯、甲苯、乙苯、二甲苯、四氯乙烯和血樣基體均不干擾苯乙烯的測定。應用本方法測定了30名苯乙烯接觸者和10名非接觸者血中苯乙烯的含量。苯乙烯接觸者血樣中苯乙烯含量范圍為0.024～0.58μg/mL，苯乙烯非接觸者血中苯乙烯含量均小于

8、檢出限。實驗表明SPME-GC法適用于血中苯乙烯的測定。 結論: 1.本文根據SPME技術的基本原理研制了SPME裝置及纖維涂層，與商品化SPME裝置及涂層相比，具有富集能力相當、價格低廉，制備工藝簡單等特點。 2.利用自制SPME裝置對尿中丙酮、血中苯乙烯的檢測方法進行規(guī)范化研究，并對該方法進行了方法學評價及各項實驗驗證，該方法各項實驗指標均符合《生物材料分析方法的研制準則(尿樣及血樣)》(WS/T 68-19