固相微萃?。⊿PME）測定生物樣品中揮發(fā)性有機(jī)物的應(yīng)用研究.pdf

1、目的: 固相微萃取(SPME)是利用涂有吸附劑的熔融石英纖維吸附樣品中的有機(jī)物質(zhì)而達(dá)到萃取濃縮的目的，具有無溶劑、可直接進(jìn)樣、操作簡便快捷、靈敏的特點(diǎn)，克服了傳統(tǒng)的樣品前處理技術(shù)的缺點(diǎn)。SPME集取樣、萃取、富集和進(jìn)樣于一體，操作簡便、分析周期短、樣品用量少、重現(xiàn)性好、易于自動(dòng)化，特別適合現(xiàn)場分析，且不用或少量使用有機(jī)溶劑，既有利于分析人員的健康又免除了對環(huán)境的二次污染。本實(shí)驗(yàn)將最新的SPME技術(shù)應(yīng)用到職業(yè)衛(wèi)生生物監(jiān)測工作中，根

2、據(jù)SPME技術(shù)的原理，自主研制SPME裝置，著重研究固相微萃取技術(shù)中固相涂層的制作方法，篩選出適合于測定尿中丙酮、血中苯乙烯的固相涂層，研究制定測定尿中丙酮、血中苯乙烯的SPME檢測方法。擬將研究的方法申報(bào)為職業(yè)衛(wèi)生生物監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)方法，在全國職業(yè)衛(wèi)生技術(shù)服務(wù)部門應(yīng)用。 方法: 1.SPME裝置的研制：根據(jù)SPME技術(shù)的基本原理自主研制了SPME裝置，SPME技術(shù)中固相涂層材料的選擇及制作工藝探討：根據(jù)有機(jī)物與溶劑間相似相容

3、原理，選擇適用于尿中丙酮、血中苯乙烯的固相涂層材料。通過改變涂層溶液濃度、涂布時(shí)間、涂布次數(shù)來改變涂層厚度，確定一個(gè)最適合上述代謝產(chǎn)物測定的涂層厚度及涂層涂布方法。 2.尿中丙酮、血中苯乙烯的SPME方法學(xué)研究：試樣量、容器體積、萃取時(shí)間、萃取溫度、攪拌方式及速率的選擇。 3.SPME與氣相色譜(GC)連用條件的選擇：包括柱類型、柱溫、進(jìn)樣口溫度、檢測器溫度的選擇、解吸溫度、解吸時(shí)間的確定。 4.現(xiàn)場應(yīng)用研究：選

4、擇接觸丙酮、苯乙烯等毒物的接毒工人進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，同時(shí)取空白樣品作對照。 結(jié)果: 1.自制SPME萃取裝置制作簡單、使用方便。適合尿中丙酮、血中苯乙烯的萃取涂層為PDMS涂層，涂層涂布3次，涂層溶液濃度50g/L，加入6％固化劑時(shí)，萃取效果較好，萃取時(shí)間適宜。用顯微鏡測得制成的PDMS涂層厚度為120μm。 2.尿中丙酮測定最優(yōu)SPME條件為無水硫酸鈉用量4克，萃取溫度為30℃，萃取時(shí)間為20min，轉(zhuǎn)速選擇為低

5、速，尿樣體積與頂空空間比例為1:3，解吸溫度為250℃，解吸時(shí)間為5min。尿中丙酮在0.0～150.0μg/mL，范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方程式為Y=3.55X+3.05，相關(guān)系數(shù)r=0.9990，檢出限為0.0008μg/mL，方法精密度良好，回收率90.7％以上，尿樣可在室溫下和4℃冰箱中保存14天，環(huán)境可能存在的丙酮共存物二氯甲烷、2-丁酮、甲醇、乙酸乙酯及尿樣中基體均不干擾丙酮的測定。應(yīng)用本方法測定了30名丙酮接觸者和10名丙酮非

6、接觸者尿中丙酮的含量。丙酮接觸者尿樣中丙酮含量范圍為0.04～62.97μg/mL，丙酮非接觸者尿樣中丙酮含量均小于檢出限。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明SPME-GC法適用于尿中丙酮的測定。 3.血中苯乙烯測定最優(yōu)SPME條件為濃磷酸15μl/2毫升血樣，萃取溫度為20℃，萃取時(shí)間為10min，轉(zhuǎn)速選擇為中速，血樣體積/頂空空間比例為1:4，解吸溫度為250℃，解吸時(shí)間為5min。血中苯乙烯在0.00～1.65μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方程

7、式為Y=187.24X-2.10，相關(guān)系數(shù)r=0.9994，檢出限為0.0006gg/mL，方法精密度良好，回收率77.O％以上，血樣可在4℃冰箱和冷凍條件下一8℃下均可保存14天，環(huán)境可能存在的苯乙烯共存物苯、甲苯、乙苯、二甲苯、四氯乙烯和血樣基體均不干擾苯乙烯的測定。應(yīng)用本方法測定了30名苯乙烯接觸者和10名非接觸者血中苯乙烯的含量。苯乙烯接觸者血樣中苯乙烯含量范圍為0.024～0.58μg/mL，苯乙烯非接觸者血中苯乙烯含量均小于

8、檢出限。實(shí)驗(yàn)表明SPME-GC法適用于血中苯乙烯的測定。 結(jié)論: 1.本文根據(jù)SPME技術(shù)的基本原理研制了SPME裝置及纖維涂層，與商品化SPME裝置及涂層相比，具有富集能力相當(dāng)、價(jià)格低廉，制備工藝簡單等特點(diǎn)。 2.利用自制SPME裝置對尿中丙酮、血中苯乙烯的檢測方法進(jìn)行規(guī)范化研究，并對該方法進(jìn)行了方法學(xué)評價(jià)及各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該方法各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)均符合《生物材料分析方法的研制準(zhǔn)則(尿樣及血樣)》(WS/T 68-19