補陽還五湯對血管性癡呆大鼠海馬cAMP-PKA-CREB信號通路的影響.pdf

1、血管性癡呆(vascular dementia,VD)是由于各種腦血管病引起的獲得性認知功能障礙,以學(xué)習(xí)、記憶功能缺損為主要癥狀,可伴有語言、運動、視空間及人格障礙等。學(xué)習(xí)和記憶是大腦的高級功能之一。目前認為,海馬與學(xué)習(xí)、記憶等高級認知功能密切相關(guān),其神經(jīng)元形態(tài)和功能的正常與否對學(xué)習(xí)、記憶的形成和維持具有重要意義。長期記憶形成需要環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)-蛋白激酶A((Prot

2、ein kinaseA,PKA)-cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP response element bindingProtein,CREB)通路的活動。補陽還五湯由黃芪、當(dāng)歸、赤芍、地龍、川芎、桃仁、紅花組成,具有補氣、活血、通絡(luò)的功能,目前在臨床上主要治療氣虛血疲所致的中風(fēng)。實驗研究發(fā)現(xiàn)補陽還五湯及其有效部位組方具有對抗腦缺血及缺血再灌注損傷,降低血液粘滯度,對抗血小板聚集,促進神經(jīng)元損傷恢復(fù)、抑制腦細胞凋亡、調(diào)節(jié)腦組織能量代謝和

3、一氧化氮的生成等作用。本文通過探討cAMP-PKA-CREB信號通路在VD中的變化,觀察補陽還五湯治療VD的效果并探討其作用機制。
　　 第一部分補陽還五湯對血管性癡呆大鼠行為學(xué)和海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)的影響
　　 目的:觀察補陽還五湯對血管性癡呆大鼠模型行為學(xué)和海馬組織學(xué)的影響。
　　 方法:健康成年SD雄性大鼠96只,分為假手術(shù)組、VD模型組、補陽還五湯組、尼莫地平組。采用改良的Pulsinelli’s四血

4、管阻斷(four-vesselocclusion,4VO)方法制備VD大鼠模型,分別給予補陽還五湯(灌胃給藥50g/kg/d))、尼莫地平(灌胃給藥20mg/kg/d)干預(yù)治療。術(shù)后28d,采用水迷宮試驗進行學(xué)習(xí)和記憶成績測試,觀察行為學(xué)改變；用HE染色觀察海馬CA1區(qū)病理學(xué)特征變化。
　　 結(jié)果:1.補陽還五湯對VD大鼠水迷宮逃避潛伏期的影響:與假手術(shù)組比較,模型組逃避潛伏期明顯延長(P<0.05)；與模型組相比,補陽還五湯組

5、和尼莫地平組在逃避潛伏期均顯著縮短(P<0.05)；補陽還五湯組和尼莫地平組相比逃避潛伏期無明顯區(qū)別(P>0.05)。2.補陽還五湯對VD大鼠水迷宮跨越平臺次數(shù)的影響:與假手術(shù)組相比,模型組大鼠跨越平臺次數(shù)均明顯減少(P<0.05)；與模型組相比,補陽還五湯組和尼莫地平組跨越平臺次數(shù)均顯著增多(P<0.05)；補陽還五湯組和尼莫地平組相比大鼠跨越平臺次數(shù)無明顯區(qū)別(P>0.05)。3.補陽還五湯對VD大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)的影響:假

6、手術(shù)組表現(xiàn)為正常組織形態(tài),海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞排列整齊,均勻,細胞結(jié)構(gòu)完整；模型組CA1區(qū)海馬神經(jīng)細胞排列散亂,界限不清楚,部分神經(jīng)元正常細胞結(jié)構(gòu)消失；補陽還五湯組及尼莫地平組病理改變明顯減輕。4.補陽還五湯對大鼠海馬CA1區(qū)正常神經(jīng)細胞數(shù)目的影響:與假手術(shù)組比較,模型組海馬神經(jīng)元數(shù)目明顯減少(P<0.05)；補陽還五湯組和尼莫地平組海馬神經(jīng)元數(shù)目明顯多于模型組(P<0.05)；且補陽還五湯組與尼莫地平組比較無明顯差別(P>0.05)。

7、
　　 小結(jié):1.4VO法可較好模擬血管性癡呆的慢性持續(xù)性缺血再灌注損傷,導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降和海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的損傷。2.補陽還五湯對VD大鼠的海馬神經(jīng)元形態(tài)學(xué)損傷具有一定的改善作用,能提高癡呆模型大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力。
　　 第二部分補陽還五湯對血管性癡呆大鼠海馬cAMP-PKA-CREB信號通路的影響
　　 目的:觀察補陽還五湯對VD大鼠海馬cAMP-PKA-CREB信號通路的影響。
　　 方

8、法:實驗分組和VD大鼠模型制備方法同第一部分,采用放射免疫分析法檢測海馬cAMP含量、免疫印跡法檢測海馬PKAc蛋白表達、電泳遷移率改變分析法觀察大鼠CREB和C/EBP的DNA結(jié)合活性的變化。
　　 結(jié)果:1.補陽還五湯對VD大鼠海馬組織cAMP含量的影響:與假手術(shù)組比較,VD模型組大鼠海馬組織cAMP含量顯著降低(P<0.01)；與VD模型組比較,尼莫地平組與補陽還五湯組大鼠海馬組織cAMP含量顯著升高(P<0.01)；尼莫

9、地平組、補陽還五湯組大鼠海馬組織cAMP含量無明顯差異(P>0.05)。2.補陽還五湯對VD大鼠海馬組織PKAc蛋白表達的影響:與假手術(shù)組比較,模型組大鼠海馬組織PKAc蛋白表達水平顯著降低(P<0.01)；與模型組比較,尼莫地平組與補陽還五湯組海馬組織PKAc蛋白表達水平顯著升高(P<0.01)；尼莫地平組、補陽還五湯組大鼠海馬組織PKAc蛋白表達水平之間無明顯差異(P>0.05)。3.補陽還五湯對VD大鼠海馬組織CREB的DNA結(jié)合

10、活性的影響:與假手術(shù)組比較,VD模型組大鼠海馬組織CREB的結(jié)合活性顯著降低(P<0.01)；與模型組比較,尼莫地平組與補陽還五湯組海馬組織CREB的結(jié)合活性顯著升高(P<0.01)；尼莫地平組、補陽還五湯組大鼠海馬組織CREB的結(jié)合活性之間無明顯差異(P>0.05)。4.補陽還五湯對VD大鼠海馬組織C/EBP的DNA結(jié)合活性的影響:與假手術(shù)組比較,模型組大鼠海馬組織C/EBP結(jié)合活性顯著降低(P<0.01)；與模型組比較,尼莫地平組與