持續(xù)氟鋁聯(lián)合暴露對二代仔鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力及cAMP-PKA-CREB信號通路的影響.pdf

1、目的：探討妊娠期和哺乳期持續(xù)染毒對二代仔鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力和海馬組織內(nèi)環(huán)磷酸腺苷（cAMP）-蛋白激酶A（PKA）-環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）信號通路的影響。
　　方法：將36只健康成年清潔級SD孕鼠隨機(jī)分為9組，每組4只。各組飲水中氟化鈉、三氯化鋁濃度分別為（0，0）、（100，0）、（200，0）、（0，500）、（0，1000）、（100，500）、（100，1000）、（200，500）、（200，1000）m

2、g/L。采用自由飲水方式進(jìn)行染毒，母鼠從妊娠第0天至一代仔鼠出生第21天（postnatal day21，PND21）染毒；一代仔鼠于PND90（性成熟）每組隨機(jī)選取6只（雌∶雄=2∶1）并進(jìn)行合籠，從其PND22（斷乳后）至二代仔鼠PND21繼續(xù)染毒；每組隨機(jī)選取二代仔鼠8只（雌雄各半），自PND22（斷乳后）～PND60（成年）繼續(xù)染毒。隔1周稱1次體重。仔鼠處死前，觀察仔鼠生理發(fā)育及神經(jīng)反射行為指標(biāo)，Morris水迷宮測試空間學(xué)習(xí)

3、記憶能力，收集12 h尿液。仔鼠處死后，留取大腦組織。采用氟離子選擇電極法測定尿氟、腦氟濃度，用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法測定尿鋁、腦鋁濃度，用酶聯(lián)免疫吸附法檢測海馬組織中cAMP蛋白的含量，用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）方法檢測海馬組織中PKA和CREB mRNA表達(dá)水平，用免疫組織化學(xué)方法檢測腦組織中PKA和p-CREB蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1、尿、腦的氟、鋁水平：與對照組比較，除單獨鋁染毒組外，其余各染

4、毒組仔鼠尿氟、腦氟水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；除單獨氟染毒組外，其余各染毒組仔鼠尿鋁、腦鋁水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；且高氟+低鋁聯(lián)合染毒組氟、鋁濃度較其他染毒組高。2、二代仔鼠生長發(fā)育及神經(jīng)反射情況：與對照組相比，第0周，除低氟、高鋁單獨染毒組及低氟+低鋁聯(lián)合染毒組二代仔鼠體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義外，其余各染毒組的體重均較低；第2、4周，高鋁單獨染毒組的體重較高，而低氟+高鋁和高氟+低鋁聯(lián)合染毒組的體重較低

5、；第6周，除氟單獨染毒組及高鋁單獨染毒組，其余各染毒組的體重均較低；第8周，低氟單獨染毒組的體重較高，其余各染毒組的體重均較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。各染毒組腦重系
　　數(shù)、開眼和出牙，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；與對照組比較，高氟組、低氟+低鋁和高氟+低鋁組平面翻正反射時間延長；除低氟組、低鋁組及低氟+低鋁，其余染毒組懸崖回避反射時間延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。3、空間學(xué)習(xí)記憶能力：與對照組比較，第2天

6、，除低氟組、低鋁組及低氟+低鋁組，第3、4天，除低氟+低鋁組外，其余各染毒組仔鼠的逃避潛伏期均延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與對照組比較，除低氟組、低鋁組和低氟+低鋁組外，其余各染毒組仔鼠的首次達(dá)平臺時間均延長及穿越平臺次數(shù)均減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。4、海馬組織中cAMP-PKA-CREB信號通路相關(guān)蛋白和基因的表達(dá)情況：與對照組比較，各濃度單獨氟染毒組、低鋁組及低氟+高鋁組cAMP蛋白的含量降低，各濃度單獨

7、氟染毒組及各濃度氟鋁聯(lián)合染毒組PKA蛋白的表達(dá)水平均降低，鋁單獨染毒組PKA蛋白的表達(dá)水平升高，各濃度氟、鋁單獨及聯(lián)合染毒組p-CREB蛋白的表達(dá)水平均降低，低鋁組及低氟+高鋁組PKA mRNA的表達(dá)水平較高，低鋁組及低氟+高鋁組及高氟+各濃度鋁組CREB mRNA的表達(dá)水平較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。5、氟鋁聯(lián)合對各指標(biāo)的聯(lián)合作用：氟鋁聯(lián)合染毒對二代仔鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力及海馬組織中PKA和CREB mRNA表達(dá)水平和cAM