血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子可溶性受體克隆、表達(dá)及其對(duì)血管生成抑制作用.pdf

1、目的:VEGFR 屬于酪氨酸激酶類,有細(xì)胞膜外與VEGF結(jié)合區(qū)、跨膜區(qū)和細(xì)胞內(nèi)酪氨酸蛋白激酶;其mRNA的不同剪切,產(chǎn)生兩種功能完全不同的受體,其一為完整的受體,另一為只有與VEGF結(jié)合功能的可溶性膜外片段,對(duì)VEGF功能起負(fù)性調(diào)節(jié)作用.為此我們克隆并表達(dá)了VEGFR膜外片段,以探討其生物學(xué)功能.結(jié)論:1.KDR 基因片段能在QIA原核表達(dá)系中得到表達(dá),表達(dá)量占菌體蛋白的5﹪左右.復(fù)性后該表達(dá)重組蛋白具有與VEGF 結(jié)合的生物學(xué)活性.但

2、Pichia酵母表達(dá)系統(tǒng)似乎不表達(dá)KDR 片段,或表達(dá)量低于該文的檢測(cè)手段的敏感性.2.sFLT-1基因片段能在QIA表達(dá)系統(tǒng)中得到表達(dá),但表達(dá)量較低,在高濃度肉湯培養(yǎng)基中表達(dá)量略高.復(fù)性后重組sFLT-1具有與VEGF特異結(jié)合的功能.3.可溶性VEGF受體能夠抑制VEGF誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和雞胚絨毛尿羹膜血管生成作用,且可溶性受體和血管抑素在細(xì)胞和組織水平具有協(xié)同作用.4.可溶性VEGF受體KDR片段對(duì)腫瘤生長(zhǎng)具有抑制作用,這種抑