可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子（VEGI）的克隆表達(dá)及功能研究.pdf

1、[目的](1)從人臍靜脈細(xì)胞中克隆VEGI<,251> cDNA的可溶性胞外區(qū)編碼基因VEGI<,72-251>,長(zhǎng)度為540bp;(2)將VEGI<,72-251>基因在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化;(3)研究可溶性VEGI<,72-251>的生物學(xué)活性及其可能的作用機(jī)制;(4)可溶性VEGI<,72-251>和sVEGI<,174>的活性比較,分析可能的機(jī)制.[結(jié)論](1)VEGI<,72-251>胞外區(qū)在大腸桿菌中

2、以包涵體的形式獲得較高的表達(dá),達(dá)菌體總蛋白的25.6﹪;(2)VEGI<,72-251>胞外區(qū)蛋白質(zhì)經(jīng)純化后,純度達(dá)到94.5﹪.經(jīng)復(fù)性后具有明顯的生物學(xué)活性,可刺激T細(xì)胞IL-2和IFN<,γ>分泌增多;(3)VEGI<,72-251>與sVEGI<,174>的生物學(xué)活性不同:雖然VEGI<,72-251>胞外區(qū)C末端的約146個(gè)氨基酸與sVEGI<,174>相同,但VEGI<,72-251>不能抑制內(nèi)皮細(xì)胞的和雞胚絨毛尿囊膜的血管生

3、成,而sVEGI<,174>則不能激PBMC細(xì)胞IL-2分泌增多.蛋白質(zhì)的氨基酸數(shù)量和增加或減少序列變化會(huì)改變蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu),從而影響蛋白質(zhì)與相應(yīng)配、受體的結(jié)合,改變蛋白質(zhì)的功能<'[24-26]>.推測(cè)VEGI<,72-251>與T細(xì)胞受體結(jié)合的結(jié)構(gòu)位于其N端,N端增加的29個(gè)氨基酸殘基具有與T細(xì)胞結(jié)合的結(jié)構(gòu);而N端增加的氨基酸殘基掩蓋了C末端與內(nèi)皮細(xì)胞受體結(jié)合的結(jié)合部位,使VEGI<,72-251>失去了對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的作用.這些推測(cè)