對苯二甲酸致膀胱損傷作用的研究.pdf

1、該研究在TPA 90天亞慢性大鼠染毒實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,觀察并探討了TPA、膀胱結(jié)石和膀胱上皮的增生三者間的因果關(guān)系,以期為闡明TPA致膀胱損傷作用的機(jī)制,確立其對人群危害作用提供科學(xué)依據(jù).第一部分 對苯二甲酸對膀胱損傷作用的機(jī)制研究 目的:該研究觀察并探討了TPA對90天亞慢性染毒大鼠膀胱的損傷作用及其機(jī)制,以期為合理評價TPA的危害性提供線索.方法:SD大鼠隨機(jī)分為5組,飼以含0％、0.04%、O.2%、1%和5%TPA的飼料,連續(xù)飼喂9

2、0天,收集血、尿和膀胱等組織與器官作進(jìn)一步分析與研究.第二部分 對苯二甲酸結(jié)石致大鼠膀胱上皮細(xì)胞增殖效應(yīng)的機(jī)制 目的:膀胱癌是泌尿外科常見的惡性腫瘤之一,由于復(fù)發(fā)率較高,死亡率逐年上升.腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞周期調(diào)控通路密切相關(guān),TPA致大鼠膀胱結(jié)石模型為研究慢性損傷致膀胱上皮增生及細(xì)胞增殖效應(yīng)提供了工具.方法:剛斷乳SD大鼠隨機(jī)分為6組,分別飼以正常及含5%TPA,5%TPA+4%NaHCO<,3>,4%NaHCO<,3>,5%TPA+0.

3、02%氫氯噻嗪和0.02%氫氯噻嗪的飼料.90天后收集膀胱標(biāo)本進(jìn)行病理學(xué)分析,以及p16<'Ink4a>,cyclinD<,1>,CDK4,EGFr,cyclin E和相關(guān)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)免疫組織化學(xué)檢測.第三部分 對苯二甲酸代謝研究 目的:探討機(jī)體能否代謝TPA,TPA及其可能代謝產(chǎn)物的DNA損傷作用,以及TPA染毒后與膀胱癌相關(guān)代謝酶的改變,為TPA的非結(jié)石致膀胱損傷作用尋找直接和間接的證據(jù).方法:采用S.typhimur

4、ium NM2009測試菌株檢測TPA分別與苯巴比妥鈉、3-甲基膽蒽及禁食誘導(dǎo)和非誘導(dǎo)肝微粒體共孵育后的誘變活性;HPLC測定肝微粒體體外孵育系統(tǒng)中,不同溫孵條件下TPA量的變化;RT-PCR法觀察比較TPA 90天染毒大鼠膀胱癌相關(guān)代謝酶CYP4B1在肝、腎和膀胱組織中的表達(dá).第四部分 對苯二甲酸染毒大鼠膀胱抑癌基因P16的分析 目的:探討TPA染毒大鼠膀胱組織中抑癌基因p16與膀胱損傷性增生的關(guān)系,為闡明TPA致膀胱損傷的分子機(jī)制提

5、供線索.方法:免疫組織化學(xué)法觀察TPA染毒大鼠膀胱組織p16蛋白的表達(dá);RT-PCR觀察p16 mRNA的改變;基因組DNA PCR分析p16基因有無缺失;限制性內(nèi)切酶Hpa Ⅱ/Msp Ⅰ酶切法檢測p16基因的甲基化.第五部分 對苯二甲酸染毒對機(jī)體脂質(zhì)代謝的影響 目的:研究TPA90天染毒后,大鼠血漿蛋白、血脂及體內(nèi)氧化應(yīng)激防御體系的變化,為評價其毒作用機(jī)制提供依據(jù).方法:SD大鼠按TPA染毒劑量依次分為0%0.04%,0.2%,1%