一氧化氮合酶在大鼠肺移植缺血再灌注損傷中的作用研究.pdf

1、本論文分為三部分：一、大鼠左肺原位移植模型的建立；二、一氧化氮合酶在大鼠肺移植缺血再灌注過程中的表達變化；三、L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注損傷中的作用研究。 一、大鼠左肺原位移植模型的建立 目的:在“三袖套管吻合法”基礎上，探討大鼠左肺原位移植最佳模型，為進一步開展移植肺缺血再灌注損傷提供動物模型基礎； 方法:顯微鏡下采用“三袖套管吻合法”完成大鼠左肺原位移植模型，通過手術成功率、手術時間、移植肺功能

2、、病理學改變和影像學檢查等評估模型的可行性； 結果:完成大鼠左肺原位移植20例，手術成功率85％。供肺灌洗到獲取完成時間13.1min±0.9min，供肺體外套管時間9.3min±0.7min，供受體動靜脈和支氣管吻合時間33.7min±1.7min。夾閉實驗顯示移植肺單肺通氣能維持20min以上。病理學證實移植肺再灌注2h能復制典型的缺血再灌注損傷模型； 結論:本實驗在“三袖套管吻合法”的基礎上，綜合國內外大鼠肺移植模

3、型的優(yōu)缺點，根據(jù)研究需要進行了適當?shù)母倪M，力圖建立大鼠左肺移植的最佳模型。模型在顯微鏡下單人完成，縮短了套管和動靜脈及支氣管的吻合時間，減少了熱缺血時間，提高了手術成功率和大鼠存活率。病理學證實本模型可以復制出典型的移植肺缺血再灌注損傷病理變化情況，是適于研究缺血再灌注損傷的理想模型。 二、一氧化氮合酶在大鼠肺移植缺血再灌注過程中的表達變化 目的:觀察一氧化氮合酶(NOS)在大鼠肺移植缺血再灌注過程中的表達變化情況；

4、方法:12只SD大鼠完成6次大鼠左肺移植，分別于開胸時(I組)、灌洗后(II組)和冷缺血后(III組)取供體大鼠右肺組織提取RNA，再灌注后2h(IV組)取供體左肺組織提取RNA，再灌注后2h取受體的右肺組織(V組)提取RNA，逆轉錄生成cDNA。應用熒光定量PCR技術檢測肺組織中的內皮型一氧化氮合酶(eNOS)和誘導型一氧化氮合酶(iNOS)的表達； 結果:與I組相比，II組、III組和V組的eNOS和iNOS無明顯變化。IV組

5、與I組相比eNOS表達明顯減低，而iNOS表達明顯升高； 結論:通過對肺移植整個缺血再灌注過程各個階段的觀察，證實再灌注是引起移植肺一氧化氮合酶變化的重要因素之一。 三、L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注損傷中的作用研究 目的:探討L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注損傷中的作用及其機制； 方法:將48只SD大鼠隨機分為4組，即肺移植組(A組)、L-精氨酸組(B組)、氨基胍組(C組)和L-精氨酸+氨

6、基胍組(D組)。每組12只，行同種異體左單肺移植。手術成功后分別腹腔注射生理鹽水、L-精氨酸、氨基胍和L-精氨酸+氨基胍。再灌注2h后取移植肺上端肺組織檢測髓過氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶活力(SOD)、內皮型一氧化氮合酶(eNOS)和誘導型一氧化氮合酶(iNOS)活性；取靜脈血測定血液中NO含量；取移植肺下端肺組織測定干濕重比(W/D)，分別對四組標本行肺組織病理形態(tài)學觀察； 結果:再灌注2h后，

7、與A組相比，B組iNOS和eNOS的活性均升高，血液中NO含量高于A組，移植肺的W/D、MPO和MDA含量降低，SOD含量增高(P均<0.05)。C組的iNOS活性降低(P<0.05)，eNOS的活性沒有變化，NO含量低于A組(P<0.05)，其W/D、SOP、MPO和MDA均無明顯變化。D組的iNOS活性降低(P<0.05)，eNOS活性升高(P<0.05)，血液中NO含量也增高(P<0.05)，其W/D、MPO、MDA均降低(P<0

8、.05)，SOD升高(P<0.05)。B組和D組相比，D組的iNOS活性降低(P<0.05)，而eNOS活性沒有變化，NO的含量降低(P<0.05)，其W/D、MPO、MDA降低(P<0.05)，SOD升高(P<0.05)。病理形態(tài)學檢查顯示D組的炎細胞浸潤及炎癥滲出最輕，B組次之，A組和C組最差； 結論:移植后再灌注早期應用L-精氨酸可以減輕移植肺的缺血再灌注損傷，聯(lián)合應用L-精氨酸和氨基胍減輕肺缺血再灌注損傷的作用好于單純應用