一氧化氮合酶在大鼠肺移植缺血再灌注損傷中的作用研究.pdf

1、本論文分為三部分：一、大鼠左肺原位移植模型的建立；二、一氧化氮合酶在大鼠肺移植缺血再灌注過(guò)程中的表達(dá)變化；三、L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注損傷中的作用研究。 一、大鼠左肺原位移植模型的建立 目的:在“三袖套管吻合法”基礎(chǔ)上，探討大鼠左肺原位移植最佳模型，為進(jìn)一步開(kāi)展移植肺缺血再灌注損傷提供動(dòng)物模型基礎(chǔ)； 方法:顯微鏡下采用“三袖套管吻合法”完成大鼠左肺原位移植模型，通過(guò)手術(shù)成功率、手術(shù)時(shí)間、移植肺功能

2、、病理學(xué)改變和影像學(xué)檢查等評(píng)估模型的可行性； 結(jié)果:完成大鼠左肺原位移植20例，手術(shù)成功率85％。供肺灌洗到獲取完成時(shí)間13.1min±0.9min，供肺體外套管時(shí)間9.3min±0.7min，供受體動(dòng)靜脈和支氣管吻合時(shí)間33.7min±1.7min。夾閉實(shí)驗(yàn)顯示移植肺單肺通氣能維持20min以上。病理學(xué)證實(shí)移植肺再灌注2h能復(fù)制典型的缺血再灌注損傷模型； 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)在“三袖套管吻合法”的基礎(chǔ)上，綜合國(guó)內(nèi)外大鼠肺移植模

3、型的優(yōu)缺點(diǎn)，根據(jù)研究需要進(jìn)行了適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)，力圖建立大鼠左肺移植的最佳模型。模型在顯微鏡下單人完成，縮短了套管和動(dòng)靜脈及支氣管的吻合時(shí)間，減少了熱缺血時(shí)間，提高了手術(shù)成功率和大鼠存活率。病理學(xué)證實(shí)本模型可以復(fù)制出典型的移植肺缺血再灌注損傷病理變化情況，是適于研究缺血再灌注損傷的理想模型。 二、一氧化氮合酶在大鼠肺移植缺血再灌注過(guò)程中的表達(dá)變化 目的:觀察一氧化氮合酶(NOS)在大鼠肺移植缺血再灌注過(guò)程中的表達(dá)變化情況；

4、方法:12只SD大鼠完成6次大鼠左肺移植，分別于開(kāi)胸時(shí)(I組)、灌洗后(II組)和冷缺血后(III組)取供體大鼠右肺組織提取RNA，再灌注后2h(IV組)取供體左肺組織提取RNA，再灌注后2h取受體的右肺組織(V組)提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA。應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)肺組織中的內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的表達(dá)； 結(jié)果:與I組相比，II組、III組和V組的eNOS和iNOS無(wú)明顯變化。IV組

5、與I組相比eNOS表達(dá)明顯減低，而iNOS表達(dá)明顯升高； 結(jié)論:通過(guò)對(duì)肺移植整個(gè)缺血再灌注過(guò)程各個(gè)階段的觀察，證實(shí)再灌注是引起移植肺一氧化氮合酶變化的重要因素之一。 三、L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注損傷中的作用研究 目的:探討L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注損傷中的作用及其機(jī)制； 方法:將48只SD大鼠隨機(jī)分為4組，即肺移植組(A組)、L-精氨酸組(B組)、氨基胍組(C組)和L-精氨酸+氨

6、基胍組(D組)。每組12只，行同種異體左單肺移植。手術(shù)成功后分別腹腔注射生理鹽水、L-精氨酸、氨基胍和L-精氨酸+氨基胍。再灌注2h后取移植肺上端肺組織檢測(cè)髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶活力(SOD)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)活性；取靜脈血測(cè)定血液中NO含量；取移植肺下端肺組織測(cè)定干濕重比(W/D)，分別對(duì)四組標(biāo)本行肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察； 結(jié)果:再灌注2h后，

7、與A組相比，B組iNOS和eNOS的活性均升高，血液中NO含量高于A組，移植肺的W/D、MPO和MDA含量降低，SOD含量增高(P均<0.05)。C組的iNOS活性降低(P<0.05)，eNOS的活性沒(méi)有變化，NO含量低于A組(P<0.05)，其W/D、SOP、MPO和MDA均無(wú)明顯變化。D組的iNOS活性降低(P<0.05)，eNOS活性升高(P<0.05)，血液中NO含量也增高(P<0.05)，其W/D、MPO、MDA均降低(P<0

8、.05)，SOD升高(P<0.05)。B組和D組相比，D組的iNOS活性降低(P<0.05)，而eNOS活性沒(méi)有變化，NO的含量降低(P<0.05)，其W/D、MPO、MDA降低(P<0.05)，SOD升高(P<0.05)。病理形態(tài)學(xué)檢查顯示D組的炎細(xì)胞浸潤(rùn)及炎癥滲出最輕，B組次之，A組和C組最差； 結(jié)論:移植后再灌注早期應(yīng)用L-精氨酸可以減輕移植肺的缺血再灌注損傷，聯(lián)合應(yīng)用L-精氨酸和氨基胍減輕肺缺血再灌注損傷的作用好于單純應(yīng)用