中國中西部地區(qū)兒童甘露聚糖結合凝集素正常參考值建立及基因型檢測.pdf

1、背景：甘露聚糖結合凝集素(mannosebinding1ectin，MBL)是一種肝臟合成的C型凝集素，是重要的先天免疫分子。ⅧL分子單鏈分子量為32一l①包括N．末端，膠原樣區(qū)，螺旋頸區(qū)和糖識別域。每3條單鏈分子聚合成一個亞基，人血清中MBL一般為六亞基組成的六聚體。MBL識別、結合病原體表面特定糖結構，介導吞噬作用，并激活MASP通過凝集素途徑激活補體。 MBL基因多態(tài)性影響其血清水平：結構基因第一外顯子點突變導致蛋白質膠原

2、區(qū)結構破壞使之易于被降解，ⅧL血清水平低下；啟動子區(qū)多態(tài)性調控轉錄，在轉錄水平影響ⅧL合成從而影響其血清水平。ⅧL基因缺陷所致MBL血清水平異常與感染性疾病、免疫性疾病等關系密切。血清ⅧL水平個體差異大，不同人群報道正常值各有不同。ⅧL基因多態(tài)性具有地區(qū)和種族差異。目前尚缺乏不同地區(qū)兒童血清MBL正常值及漢族、維吾爾族人群基因型分布特點相關報道。目的：測定中國中西部地區(qū)重慶、武漢、烏魯木齊三地健康新生兒臍帶血、重慶地區(qū)O一6歲健康兒童血

3、清MBL水平，以了解不同地區(qū)兒童MBL水平是否存在差異、并建立地區(qū)兒童血清MBL正常參考值范圍。 通過對漢族、維吾爾族普通人群及低MBL血癥人群MBL血清水平和基因型檢測以了解在漢族、維吾爾族人普通人群中MBL基因多態(tài)性分布；基因多態(tài)性與血清MBL蛋白表達水平的關系；低MBL血癥人群的主要基因突變類型。 方法：隨機選取重慶、武漢、烏魯木齊三地足月順產健康新生兒396例；重慶市健康兒童共470例；健康成人獻血員87例作對照

4、。EUSA法檢測血清MBL水平。隨機選取重慶市漢族兒童120例，烏魯木齊市維吾爾族兒童119例；低MBL水平樣本9例，應用PCR—RFLP法、PCR。SSP法檢測ⅧL基因多態(tài)性。 結果： 1、重慶、武漢、烏魯木齊三地足月順產新生兒血清MBL水平無顯著性差異(P＞O.05)。 2、重慶市O一6歲正常兒童血清MBL水平中位數為2536ng/ml，95％可信區(qū)間為161—5070ng/ml。O一5月、6月一2歲、3—6

5、歲各組兒童和成人組MBL水平組間比較無統(tǒng)計學差異。不同性別組MBL水平無統(tǒng)計學差異(P>O.05)。 3、臍血組MBL水平較兒童組、成人組均低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜O.05)。 4、低MBL樣本組54密碼子突變率和LxP單體型頻率高于普通人群(P＜0.05)。 5、漢族人和烏魯木齊維吾爾族54密碼子突變率無統(tǒng)計學差異(P=0.054)。重慶漢族人、烏魯木齊維吾爾族人中均未檢出57密碼子突變樣本。 6、漢

6、族人X基因頻率(0.21)較維吾爾族(O.13)高(P＜0.05)，Q基因頻率較維吾爾族低(P＜O.01)。HYPA為漢族、維族最常見的單體型(頻率分別為0.48、O.47)。漢族吖QA型頻率低于維吾爾族(P＜0.05)，LX隊型頻率高于維吾爾族(P＜0.05)。 7、漢族、維族不同基因型均以54密碼子的AA、仙、BB基因型分別對應高、中、極低血清MBL水平，三組比較有顯著性差異(P＜0.001)。啟動子．550位點的HH、HL

7、、LL基因型分別對應高、中、低血清ⅧL水平三組比較有顯著性差異(P＜0.001)。啟動子一22l位點的YY、XX基因型分別對應高、中、低血清MBL水平三組比較有顯著性差異(P＜0.05)。啟動子+4位點即、PQ、QQ基因型組間比較無顯著性差異(p=O.389)。 8、HyP單體型攜帶者ⅧL水平(中位數=2057n咖1)較LxP基因攜帶者(中位數=345n/m1)和54密碼子突變組(中位數=216n/m1)高。 9、MBL

8、基因．550、一22l及54密碼子位點SNP對MBL水平影響有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)，A、H、Y等位基因對應高MBL水平，B、L、X等位基因對應低ⅧL水平；+4SNP位點多態(tài)性對MBL水平影響無統(tǒng)計學差異。 結論： l、建議將16l一5070ng/ml作為兒童血清MBL水平正常參考值。 2、重慶、武漢、烏魯木齊三地漢族、維吾爾族新生兒血清MBL 水平無地區(qū)及民族差異。 3、出生時MBL水平偏低

9、，出生后很快可達到成人水平，說明MBL重要先天免疫分子，可能在兒童免疫脆弱期發(fā)揮重要的非特異性抗感染免疫作用。 4、漢族人和維吾爾族普通人群MBL結構基因第一外顯子突變以54密碼子突變?yōu)橹?，未檢出57密碼子突變。漢族具有較高x基因及LXPA單體型頻率，維吾爾族具有較高Q基因及吖QA單體型頻率。5、漢族、維吾爾族ⅧL基因型分布均以HYP/HYP最高，LYQ／LYQ，LYQ幾XP最低。 6、漢族低mL人群MBL主要基因型為結