

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、甘露聚糖結合凝集素(MBL)為肝細胞分泌的一種血清糖蛋白,屬于C型凝集素超家族中膠凝素家族的成員,是天然免疫系統(tǒng)中重要的模式識別分子。成熟MBL肽鏈自N端至C端依次有富含Cys的N端區(qū)、膠原樣區(qū)(CLR)、頸區(qū)和C端糖識別域(CRD)。MBL在機體抗感染天然免疫中起重要作用。它利用CRD選擇性識別和結合多種病原體表面以D-甘露糖、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰甘露糖胺、N-乙酰半乳糖胺、巖藻糖等為末端糖基的糖結構。已發(fā)現(xiàn)CRD能識別和結合細菌
2、、病毒、酵母、利什曼原蟲等一系列病原體。MBL又籍其CLR經(jīng)由凝集素途徑激活補體系統(tǒng),發(fā)揮溶菌或間接調(diào)理吞噬功能;還能與吞噬細胞表面的膠凝素受體(即C1q受體)結合,起直接調(diào)理作用。 目前,關于MBL分子CRD的研究,生化學家著眼于其糖識別的分子機制,免疫學家則集中于CRD的微生物識別譜,而沒有考慮CRD是否還有其它功能。近年來有研究提示,MBL能抑制流感病毒感染細胞,且這一作用不依賴補體;MBL還能干擾病毒粘附到宿主細胞,影響
3、病毒的傳播和釋放。但未對這種作用與MBL結構的關系進行研究。認為,也許正如抗體的Fab片段除了識別抗原外還有中和毒素、中和病毒作用一樣,MBL的CRD特別是具有較高親和力的寡聚CRD可能具有中和病毒及阻抑細菌粘附等直接效應功能。 為了探索上述可能性,本研究中,將MBL-CRD基因在大腸桿菌系統(tǒng)中進行表達,獲得純化的重組CRD多聚體蛋白,在對其配體結合活性進行分析的基礎上,初步研究了MBL-CRD對病原體的直接效應。 一、
4、多聚化重組人MBL糖識別域的制備 采用基因工程技術,以含有漢族人野生型MBL全長編碼區(qū)cDNA的質(zhì)粒pGEM-MBL為模板,擴增出長度為447bp的人MBL頸區(qū)及CRD基因片段,將其克隆至pGEX-4T-1原核表達載體中,導入大腸桿菌,以IPTG誘導重組pGEX4T-CRD質(zhì)粒表達GST-CRD融合蛋白。對以包涵體形式存在的GST-CRD融合蛋白經(jīng)8mol/L脲變性、梯度復性,獲得結構折疊正確的重組蛋白;經(jīng)GSTrap層析柱進一
5、步純化后,在Ca2+存在的條件下,反復透析形成多聚體蛋白。又經(jīng)凝血酶酶切,獲得了純化的CRD蛋白,但產(chǎn)率較低。 二、人MBL-CRD融合蛋白的配體結合活性研究 用ELISA和形態(tài)學的方法對重組GST-CRD融合蛋白的配體結合活性進行了鑒定。使用甘露糖、甘露聚糖、甘露糖胺、半乳糖胺、葡糖胺、N-乙酰半乳糖胺等6種糖和大腸桿菌、福氏痢疾桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、Ⅰ型肺炎球菌及甲型流感病毒等5種病原體進行配體結合試驗。ELISA分
6、析發(fā)現(xiàn),GST-CRD融合蛋白能與糖基配體及多種病原體有效結合,且融合蛋白與大腸桿菌的結合可被甘露聚糖所抑制。形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn),F(xiàn)ITC標記的GST-CRD蛋白與細菌在37℃反應1h后,在熒光顯微鏡下可見熒光著色的細菌凝集成塊,且這種作用是Ca2+依賴的。因此,我們制備的GST-CRD融合蛋白具有MBL-CRD蛋白的配體結合活性。 三、人MBL-CRD對病原體的直接效應研究 選取Ⅱ型肺泡上皮細胞系A549和大腸上皮細胞系L
7、ovo分別作為Ⅰ型肺炎球菌(G+細菌)和福氏痢疾桿菌(G-細菌)的靶細胞,對GST-CRD融合蛋白能否阻抑其黏附的直接效應功能進行了初步研究。通過粘附的時間曲線和劑量曲線可以看出,F(xiàn)ITC標記細菌粘附靶細胞的過程是特異的。將不同稀釋度的GST-CRD融合蛋白與細菌于37℃作用1h后,加入到靶細胞粘附3h,洗滌后后用熒光顯微鏡觀察,發(fā)現(xiàn)融合蛋白濃度逐漸降低時,粘附至靶細胞上的FITC標記的病原體明顯增多。軟件分析粘附細菌數(shù),數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學分
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 甘露聚糖結合凝集素的分離純化和活性研究.pdf
- 甘露聚糖結合凝集素對人中性粒細胞功能的影響.pdf
- 斑馬魚(Danio rerio)甘露糖結合凝集素母源性免疫功能.pdf
- 甘露糖結合凝集素在SLE疾病中的作用及其機制的研究.pdf
- 甘露聚糖結合凝集素調(diào)節(jié)獲得性免疫應答的初步研究.pdf
- 重組綿羊甘露聚糖結合凝集素(MBL)的制備及其對綿羊抗病效果的分析.pdf
- 甘露聚糖結合凝集素誘導U937細胞凋亡機制的初步探索.pdf
- 甘露聚糖結合凝集素對T淋巴細胞免疫功能調(diào)節(jié)作用的初步研究.pdf
- 甘露糖結合凝集素在IgA腎病中作用及其分子機制的初步研究.pdf
- 甘露聚糖結合凝集素(MBL)阻遏人巨細胞病毒感染MD-DC細胞的研究.pdf
- 蘋果MLO基因家族和甘露糖結合凝集素基因的克隆及表達分析.pdf
- 小鼠甘露聚糖結合凝集素(mMBL-A、mMBL-C)的克隆與表達及其功能研究.pdf
- 甘露糖結合凝集素與2型糖尿病大血管病變的關系.pdf
- 甘露聚糖結合凝集素與相關絲氨酸蛋白酶相互作用的初步研究.pdf
- 奶牛甘露糖結合凝集素基因MBL1多態(tài)性研究及其抗性分析.pdf
- 甘露聚糖結合凝集素對抗原提呈細胞分化與功能的調(diào)節(jié)作用.pdf
- 甘露糖結合凝集素在1型糖尿病腎病早期診斷中的價值.pdf
- 寧夏回族和漢族人群甘露糖結合凝集素基因多態(tài)性研究.pdf
- 大豆凝集素糖配體的篩選及其對體內(nèi)結合率的影響.pdf
- 甘露糖結合凝集素在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機制中的作用.pdf
評論
0/150
提交評論