茄科蔬菜灰霉病菌對(duì)嘧霉胺抗藥性研究.pdf

1、灰霉病是由灰葡萄孢(BotrytiscinereaPers.)引起的一種重要病害，是番茄、辣椒和茄子等茄科作物上的主要病害之一。由于灰葡萄孢菌在遺傳上存在異核現(xiàn)象，在自然種群中存在十分豐富的多樣性，在藥劑選擇壓作用下，自然存在的抗藥性個(gè)體極易被篩選而形成抗藥性的亞群體，從而導(dǎo)致防治效果下降甚至失效的局面。在眾多用于灰霉病化學(xué)防治的藥劑中，以嘧霉胺(pyrimethanil)為代表的苯胺基嘧啶類殺菌劑是目前應(yīng)用于灰霉病防治的重要?dú)⒕鷦┲?/p>

2、。雖然嘧霉胺在國(guó)內(nèi)使用年限不長(zhǎng)，但是由于其作用位點(diǎn)單一，田間抗藥性已有陸續(xù)的報(bào)道。為了更有效的控制灰霉病害，延長(zhǎng)藥劑的使用年限，有必要對(duì)藥劑的抗性現(xiàn)狀和抗性菌株的適應(yīng)性進(jìn)行研究。 本研究采用菌絲生長(zhǎng)速率法，選用組合培養(yǎng)基(Chapenlnd,1999)測(cè)定了來(lái)自浙江寧波、金華、嘉興等不同地區(qū)保護(hù)地蔬菜上采集分離的48個(gè)灰霉病菌菌株對(duì)嘧霉胺的抗性，發(fā)現(xiàn)高抗菌株4個(gè)(占8.33％)，中抗菌株2個(gè)(占4.17％)，低抗菌株6個(gè)(占12

3、.5％)，敏感菌株36個(gè)(占75％)。抗性菌株在無(wú)藥培養(yǎng)基上經(jīng)10代繼代培養(yǎng)后，再進(jìn)行抗性評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)其抗嘧霉胺特性能穩(wěn)定遺傳。 選取對(duì)嘧霉胺敏感性不同的灰葡萄孢菌菌株BC-T-4-28(S)、BC-T-4-69(MR)和BC-T-1-37(HR)，分別對(duì)這些菌株的菌絲擴(kuò)展速率、菌絲干重、產(chǎn)孢和胞外酶(果膠酶和纖維素酶)活性等生理生化指標(biāo)進(jìn)行了比較。結(jié)果表明：不同敏感性的灰霉菌株之間菌絲擴(kuò)展速率、菌絲干重和產(chǎn)孢量，隨著抗性的增加都

4、有一定程度的減小。對(duì)不同敏感性的灰葡萄孢菌菌株的致病性的研究也表明，敏感性不同的灰葡萄孢菌菌株之間致病性隨抗藥性的增加也有一定程度的減少。通過(guò)對(duì)果膠酶和纖維素酶活性的測(cè)定，我們得到抗性不同的灰霉菌株果膠酶活力和纖維素酶活力隨著抗性的增加酶活力都呈減小趨勢(shì)，這一結(jié)果與嘧霉胺的抑制之一抑制病菌胞外酶分泌相一致。 眾多研究報(bào)道表明，灰霉病菌株系間存在較大遺傳學(xué)差異和形態(tài)學(xué)上的差異?；移咸焰咧辽儆蓛煞N不同的同域親緣種(sympatric

5、siblingspecies)組成，區(qū)別是轉(zhuǎn)位因子Boty和Flipper的有無(wú)。含有轉(zhuǎn)座子Boty和Flipper的稱為transposa,不含轉(zhuǎn)座子的稱為vacuma，transposa和vacuma菌株間可發(fā)生遺傳重組。本研究試圖分析灰葡萄孢菌的轉(zhuǎn)位因子在中國(guó)的灰葡萄菌中是否也存在，他們的存在方式，他們的存在與地域和灰霉菌對(duì)嘧霉胺抗性之間是否存在相關(guān)性。本研究對(duì)123個(gè)灰霉菌株進(jìn)行單孢分離并提取基因組DNA，根據(jù)已經(jīng)報(bào)道的Boty

6、和Flipper序列設(shè)計(jì)合成引物，擴(kuò)增該兩個(gè)片斷。結(jié)果表明6.5％的菌株只含有Boty，25.2％菌株只含有Flipper，43.1％的菌株同時(shí)含有Boty和Flipper兩個(gè)轉(zhuǎn)位因子，25.2％的菌株不含Boty和Flipper兩個(gè)轉(zhuǎn)位因子。以其中一個(gè)含有兩種轉(zhuǎn)位因子的灰霉菌株基因組DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在NCBI上進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果表明：所得的片斷Boty和Flipper分別與Diole等2002年