辣椒疫霉對氟吡菌胺的抗藥性風(fēng)險(xiǎn)研究.pdf

1、辣椒疫病是由辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）引起的一種毀滅性的土傳病害，該病原抗逆性強(qiáng)、生存力強(qiáng)，嚴(yán)重威脅著世界各辣椒產(chǎn)區(qū)的種植和產(chǎn)量。目前生產(chǎn)上的治理策略主要以化學(xué)防治為主，但由于內(nèi)吸性殺菌劑的大量使用，辣椒疫霉的抗藥性問題日益突出。氟吡菌胺是一種新型結(jié)構(gòu)的苯甲酰胺類殺菌劑，對常見卵菌引起的病害具有良好防效，尚未大面積推廣使用。為探明辣椒疫霉對氟吡菌胺的抗藥性風(fēng)險(xiǎn)，本研究主要從辣椒疫霉對氟吡菌胺的敏感基線、抗藥性

2、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)、抗藥突變體產(chǎn)生抗藥性的機(jī)制、抗藥突變體的表型等方面進(jìn)行系統(tǒng)深入的研究和探討，主要結(jié)果如下：
　　1.辣椒疫霉對氟吡菌胺的敏感基線。采用菌絲生長速率法測定了重慶市6個(gè)主要辣椒種植區(qū)縣的110個(gè)辣椒疫霉菌株對氟吡菌胺的敏感性。結(jié)果表明，氟吡菌胺對110株辣椒疫霉菌株均具有良好的抑制效果，平均EC50值為0.3222±0.1080μg/mL。不同地區(qū)菌株間EC50值差異較小，其中最大為0.5719μg/mL，最小為0.1028

3、μg/mL，相差5.6倍。辣椒疫霉對氟吡菌胺的敏感性頻率分布呈連續(xù)單峰曲線，接近正態(tài)分布，因此可作為敏感基線用于田間監(jiān)測辣椒疫霉病菌對氟吡菌胺的敏感性。
　　2.通過紫外誘導(dǎo)獲得3株辣椒疫霉抗氟吡菌胺突變體，突變頻率為0.86％，抗性水平分別為69.5、98.5、94.2倍。根據(jù)FAO對抗性劃分標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合敏感基線及抗藥突變體的抗性水平，本試驗(yàn)共獲得3株中抗辣椒疫霉突變體。其中部分抗藥突變體的生物學(xué)性狀在菌絲生長、溫度適應(yīng)能力、致病

4、力、產(chǎn)孢子囊能力方面與親本菌株無顯著性差異，部分抗性菌株則顯著低于親本菌株，但仍有致病力和產(chǎn)孢子囊能力，且3個(gè)抗藥突變體均能穩(wěn)定遺傳。交互抗性測定結(jié)果表明，氟吡菌胺與甲霜靈、霜脲氰、烯酰嗎啉、丁吡嗎啉、嘧菌酯之間不存在交互抗性。綜合以上結(jié)果分析表明，辣椒疫霉菌對氟吡菌胺具有一定的抗性風(fēng)險(xiǎn)。因此，氟吡菌胺的連續(xù)使用有利于抗藥性群體的發(fā)展，生產(chǎn)上使用時(shí)應(yīng)與無交互抗性的藥劑混合或交替使用。
　　3.抗氟吡菌胺突變體及其親本菌株的生理生化

5、機(jī)制。結(jié)果表明：抗藥突變體和其親本菌株對高、中、低滲透壓均表現(xiàn)敏感，且抗藥突變體的滲透壓調(diào)節(jié)能力要大于親本菌株。在葡萄糖濃度法和氯化鈉濃度法的滲透壓環(huán)境下，抗藥突變體對滲透壓表現(xiàn)出不同的調(diào)節(jié)方式，葡萄糖能作為營養(yǎng)物質(zhì)供給病原菌，而 NaCl則不能作為營養(yǎng)物質(zhì)被利用。所有的菌株細(xì)胞膜通透性在低濃度時(shí)能夠滲漏出較多的電解質(zhì)，抗藥突變體的電導(dǎo)率在一定范圍內(nèi)明顯高于親本菌株，在較高濃度下則低于親本菌株。隨著氟吡菌胺處理時(shí)間的延長，抗藥突變體和親

6、本菌株的β-1,3葡聚糖酶的活力均呈下降趨勢，且抗藥突變體的β-1,3葡聚糖合成酶的活力低于親本菌株。不同的抗藥突變體與親本菌株的蛋白質(zhì)含量不成規(guī)律性。
　　4.采用Biolog表型芯片技術(shù)，測定了辣椒疫霉抗氟吡菌胺突變體及其親本菌株對 PM1-3微孔板的碳氮源物質(zhì)利用情況和對PM21-22微孔板中化學(xué)物質(zhì)的敏感性。結(jié)果表明：抗藥突變體和親本菌株均能利用PM1、PM2中的190種碳源物質(zhì)，所有的菌株對PM1中95種碳源物質(zhì)的利用能

7、力要大于PM2中的物質(zhì)，且抗藥性突變體對碳源的利用能力與親本菌株相當(dāng)，并未出現(xiàn)較大差異?？顾幫蛔凅wBS11-5-1對PM3中95種氮源物質(zhì)的利用與其親本菌株相當(dāng)，且均能達(dá)到較大的利用效率，而抗藥突變體JLP11-4-2、JLP11-4-3及其親本菌株對PM3中氮源物質(zhì)的利用均較低。對化學(xué)物質(zhì)的敏感性測定結(jié)果表明：抗藥突變體與親本菌株對PM21-PM22中化學(xué)物質(zhì)的敏感性存在一定差異，抗藥突變體表現(xiàn)出對化學(xué)物質(zhì)更加敏感。表明可以根據(jù)化學(xué)敏