中國桃褐腐病菌及其抗藥性相關(guān)研究.pdf

1、本研究第一次系統(tǒng)地描述了我國的桃褐腐病菌，確定了包括一個新種，一個新新記錄種在內(nèi)的三種桃褐腐病菌。克隆并分析了不同桃褐腐病菌的交配型位點，揭示了桃褐腐病菌為異宗配合真菌。此外，對我國廣泛分布的美澳型核果褐腐病菌Monilinia fructicola進行了遺傳多樣性分析，并評估了其對QoI類殺菌劑產(chǎn)生抗藥性的風險，最后篩選了一種適合利用M.fructicola菌株菌絲測定對SDHI殺菌劑敏感性的培養(yǎng)基，具體結(jié)果如下:
　　 1.

2、通過對我國桃褐腐病菌生物學性狀和對其ITS序列，微管蛋白(TUB2)以及甘油醛-3-磷酸脫氫酶(G3PDH)基因片段的測序分析，明確了我國的桃褐腐病菌共有3個種，分別是M.fructicola，新記錄種Monilia mumecola，和新種Moniliayunnanensis sp.nov.。對ITS，TUB2和G3PDH的系統(tǒng)發(fā)育分析表明M.yunnanensis與歐洲最為普遍的桃褐腐病菌M.fructigena最為相近。有趣的是，

3、M.yunnanensis和M.fructigena的Cytb基因在內(nèi)含子/外顯子結(jié)構(gòu)分布上差異明顯。三種桃褐腐病菌中，M.fructicola在我國分布最廣，從北京，山東，湖北，浙江，福建，陜西，甘肅以及云南等地的病桃上都分離到了M.fructicola，M.mumecola之前僅在日本的梅上分離到，本研究首次從湖北省桃上分離到該種。M.yunnanensis則是我們新發(fā)現(xiàn)的一個種，目前為止僅從云南，陜西等省分離到。同時設(shè)計了一個多重

4、PCR檢測方法，可快速鑒定我國桃褐腐病菌M.fructicola，M.mumecola和M.yunnanensis。
　　 2.克隆了桃褐腐病菌全部五個種的交配型位點，經(jīng)過測序分析表明M.fructicola，M.fructigena，M.laxa，M.mumecola和M.yunnanensis菌株都為異宗配合真菌。在所有桃褐腐病原菌MAT1-1型菌株交配型位點上，包含一個MAT1-1-5基因和含有alpha-domain的M

5、AT1-1-1基因，而MAT1-2型菌株交配型位點上則存在一個含HMG-domain的基因MAT1-2-1與MAT1-2-4。此外，M.yunnanensis的MAT1-2型菌株MAT1-2-4下游的非編碼區(qū)中存在一段930 bp的插入。進一步分析發(fā)現(xiàn)，所有MAT1-1型菌株交配型位點中都含有MAT1-2-1的部分片段，而MAT1-1型菌株的MAT1-1-1與MAT1-2型菌株的MAT1-2-4基因之間具有77.4％～91.8％的序列相

6、似性（覆蓋率為7.6％～27.8％）。利用不同桃褐腐菌株間‘idiomorph’區(qū)域的差異，設(shè)計了三個特異性引物鑒定桃褐腐病菌全部五個種的交配型。進而根據(jù)PCR結(jié)果，選取了不同交配型的M.mumecola菌株和M.yunnanensis菌株分別同時接種桃，最后成功誘導(dǎo)出M.yunnanensis的子囊盤。
　　 3.利用RAPD技術(shù)對我國不同地區(qū)的M.fructicola菌株進行多樣性分析，結(jié)果表明福建菌株遺傳距離與其它菌群最遠

7、。Nei氏多樣性指數(shù)和香農(nóng)多樣性指數(shù)表明北京的菌株群體的多樣性最高。這些結(jié)果揭示了M.fructicola菌株可能早在2005年，其被首次報道以前就已經(jīng)存在于我國。
　　 4.克隆并測序分析了M.fructicola菌株QoI類殺菌劑的靶標Cyt b基因，基因全長11927 bp，包含7個長度為1592，1318，1166，1252，1065，2131和2227 bp的內(nèi)含子，分別位于其cDNA序列的第201，393，429，4

8、90，506，779和811位。其中，上述1166bp的內(nèi)含子為Ⅰ型自剪切內(nèi)含子，位于Cytb基因cDNA序列429位（氨基酸序列143位）。PCR擴增測序表明美國和中國的M.fructicola菌株Cytb基因143位點后都存在此內(nèi)含子，預(yù)示著143位點的1166 bp內(nèi)含子是廣泛存在的。雖然143位點發(fā)生突變(G143A)是植物病原菌抗QoIs的突變熱點，但由于Mfructicola菌株普遍存在143位點的1166bp內(nèi)含子，其產(chǎn)生

9、G143A突變從而導(dǎo)致對QoIs高抗性的可能性極小。
　　 5.當使用富營養(yǎng)培養(yǎng)基(如PDA)測定M.fruticola菌絲對SDHI類殺菌劑的敏感性時，即使在含高濃度SDHIs的培養(yǎng)基中也不能完全抑制菌絲生長。而在所測試的培養(yǎng)基中，MM培養(yǎng)基不僅能使菌絲最快生長，而且在低濃度的SDHIs存在時，就能很好地抑制M.fructicola菌絲生長。MM培養(yǎng)基上，M.fructicola菌株對啶酰菌胺(boscalid)，氟吡菌酰胺(