一種新型苯乙酮衍生物誘導人早幼粒白血病HL-60細胞凋亡機制的研究.pdf

1、苯乙酮衍生物近年來在新型藥劑創(chuàng)制中具有獨特的地位,其在醫(yī)藥領域表現(xiàn)出良好的生物活性,成為化學界和生物醫(yī)學界研究的熱點之一。
　　本研究檢測了一種新型苯乙酮衍生物1-(4-烯丙氧基-3-羥基)-2-氯苯乙酮作用于HL-60細胞的毒性,并進一步探究了其誘導HL-60細胞凋亡的機制,結果如下:
　　(1) MTT法測試細胞毒性結果顯示,該化合物對HL-60有較強的毒性,作用存在劑量時間效應。化合物作用 HL-60的IC50,在24

2、h和48h時分別為10.96±1.12μmol/L和7.01±0.14μmol/L。采用吉姆薩染色和Hoechst33258熒光染色進一步觀察細胞形態(tài)及其核變化發(fā)現(xiàn),10、20μmol/L的化合物分別作用HL-60細胞24h后,細胞染色質凝縮,細胞核碎裂,多核狀態(tài)明顯,呈現(xiàn)細胞凋亡特征。
　　(2) PI染色經(jīng)流式細胞儀分析細胞周期結果顯示,較低濃度(10μmol/L)化合物作用于HL-60細胞后,主要將G1和S期細胞阻滯在G2/

3、M期,有少量細胞凋亡;濃度提升至20μmol/L時,G2/M期細胞減少,凋亡細胞明顯增加。G2/M期阻滯是細胞DNA損傷激活檢驗點的結果,因此G2/M期周期阻滯可能是化合物引起HL-60細胞凋亡的途徑之一。
　　(3)通過DCFH-DA染色法檢測活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)和試劑盒檢測GSH和GSSG發(fā)現(xiàn),10和20μmol/L的化合物分別作用6、12、24h時,HL-60細胞內(nèi)ROS含量增加

4、與GSH含量的降低在同一作用濃度和時間下相對應,且兩者的含量變化均表現(xiàn)出明顯的劑量時間效應,說明該化合物導致細胞氧化脅迫升高。
　　(4)通過MTT測試顯示,與10、20μmol/L化合物單獨處理組相比,聯(lián)合NAC作用HL-6024h后,細胞的存活率均顯著回升;結合光學顯微鏡下觀察到的聯(lián)合作用組的細胞密度回升、細胞碎片減少、胞體恢復圓形,以及DCFH-DA染色法檢測的聯(lián)合作用組胞內(nèi)ROS含量的下降,均表明NAC是通過降低細胞內(nèi)的R

5、OS含量來抑制化合物對HL-60細胞的氧化損傷作用,說明ROS的積累在該化合物誘導的HL-60細胞凋亡中發(fā)揮重要作用。
　　(5)對胞內(nèi)GSH檢測發(fā)現(xiàn),該化合物與NAC聯(lián)合作用HL-60細胞24h后,胞內(nèi) GSH含量與化合物單獨作用組相比上升不顯著。說明 NAC的加入可能沒有影響GSH的含量,這可能與NAC的抗氧化活性作用方式有關。
　　以上結果顯示胞內(nèi)ROS含量的上升可能是化合物誘導HL-60細胞周期阻滯并進一步導致凋亡的