二烯丙基二硫抗人白血病HL-60細胞作用及機制的研究.pdf

1、最近的研究結果表明，各類型的白血病均高表達血管內皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)，進展期及晚期白血病病人VEGF表達更高。抑制白血病細胞生成和釋放VEGF有可能抑制腫瘤的生長和轉移，改善患者的預后。survivin是迄今發(fā)現(xiàn)最強的凋亡抑制因子。在ALL、AML、CML加速期和急變期的原代白血病細胞中也檢測到survivin蛋白的過表達。 二烯丙基二硫(diallyl

2、 disulfide，DADS)是大蒜中的一種脂溶性的有效成分，對白血病細胞有抑制作用。本實驗將探討二烯丙基二硫對人白血病HL-60細胞的作用過程中VEGFmRNA的表達及VEGF蛋白分泌的改變，研究二烯丙基二硫抑制人白血病HL-60細胞生長的機制；同時探討是否伴隨著SUFVivin蛋白表達的變化，為DADS抗腫瘤臨床應用提供實驗依據。 第一部分 二烯丙基二硫對人白血病HL-60細胞VEGF表達及分泌的影響目的：探討二烯

3、丙基二硫(DADS)對人白血病HL-60細胞的生長抑制作用和HL-60細胞血管內皮細胞生長因子(VEGF)mRNA的表達及VEGF蛋白分泌的變化。 方法：采用MTT法觀察DADS對體外培養(yǎng)的HL-60細胞的生長抑制；應用ELISA法檢測藥物作用前后HL-60細胞培養(yǎng)上清液中VEGF蛋白的含量；半定量RT-PCR法檢測藥物作用前后HL-60細胞ⅦGF mRNA。 結果：DADS對HL-60細胞具有明顯的生長抑制效應，其對H

4、L-60細胞的生長抑制率與藥物濃度有明顯依賴關系(r>0.9，P<0.01)，各實驗組隨時間增加抑制率明顯增加(r>0.7，P<0.01)；DADS三個濃度組(0.625，1.25，2.5 μg/mL)作用HL-60細胞48h和72h與空白對照相比均能下調HL-60細胞VEGFmRNA的表達及VEGF蛋白的分泌(P<0.01)，DADS三個濃度組組間差異具有顯著性(P<0.01)，其下調HL-60細胞VEGFmRNA的表達及VEGF蛋白

5、的分泌效果與濃度相關(r>0.9，P<0.01)。 結論：DADS能明顯抑制人白血病HL-60細胞的增殖：DADS可能通過抑制人白血病HL-60細胞VEGF mRNA的表達及VEGF蛋白分泌發(fā)揮抗白血病的效應。 第二部分 二烯丙基二硫對人白血病HL-60細胞增殖的影響及其機制探討 目的：探討二烯丙基二硫(DADS)對人白血病HL-60細胞增殖的影響及survivin蛋白表達的變化和細胞周期的改變之間的關系

6、，從而探討DADS的抗白血病機制。 方法：采用MTT法觀察DADS對體外培養(yǎng)的HL-60細胞增殖的影響；應用SP-免疫細胞化學法檢測DADS作用前后HL-60細胞內survivin蛋白的含量；同時用流式細胞儀(FCM)檢測細胞周期變化。 結果：DADS對HL-60細胞具有明顯的生長抑制效應。其對HL-60細胞的生長抑制率與藥物濃度、時間有明顯依賴關系(r>0.9，P<0.01)。0.625μg/mL DADS干預HL-6

7、0細胞24小時，細胞生長抑制率為8.94％，隨著濃度增加，時間延長，20.0 μg/mL的DADS作用HL-60細胞72小時后，細胞抑制率升高至70.66％。SP免疫組化顯示空白對照組及DMSO溶媒對照組均有survivin蛋白的高表達，其染色強度指數(SII)分別為1125及1126，兩者無顯著性差異(P>0.05)。5、10、20 ug/mL的DADS作用于HL-60細胞24、48及72小時能呈時間、濃度依賴性下調survivin蛋

8、白的表達(r>0.9，P<0.01)，20 μg/mL的DADS作用于HL-60細胞72小時，SII為119，survivin蛋白表達抑制最為明顯。DADS三個濃度組間survivin蛋白表達均有顯著性差異(P<0.01)，與空白對照組比較也均有顯著性差異(P<0.01)。流式細胞儀檢測結果提示，伴隨著survivin蛋白的下調，DADS可呈濃度、時間依賴性阻滯細胞于G2/M期(r>0.9，P<0.01)。20 μg/mL的DADS作用

9、于HL-60細胞72小時G2/M期細胞比例達最高峰，為66.56％。 結論：DADS能明顯抑制人白血病HL-60細胞的增殖；DADS下調survivin蛋白，并使人白血病HL-60細胞阻滯于G2/M期。 綜上所述，DADS能明顯抑制人白血病HL-60細胞的增殖；DADS可能通過抑制人白血病HL-60細胞VEGF mRNA的表達及VEGF蛋白分泌發(fā)揮抗白血病的效應。DADS同時下調survivin蛋白，并使人白血病HL-6