血小板活化因子受體拮抗劑PMS-1077誘導人類急性早幼粒白血病細胞HL-60分化和人類B淋巴瘤細胞Raji凋亡機制的研究.pdf

1、目的：探討一種血小板活化因子受體拮抗劑，英文名：2-N,N-Diethylaminocarbonyloxymethyl-1-diphenylmethyl-4-(3，4，5-trimethoxyb enzoyl)piperazine，hydrochloride，簡稱(PMS-1077)誘導HL-60細胞分化和Raji細胞凋亡的機制。已知該化合物的抗血小板和抗HIV活性，抗腫瘤活性尚未見報道。 方法：用不同濃度PMS-1077處理急

2、性早幼粒白血病細胞HL-60和B淋巴瘤細胞Raji細胞24、48、72h后，經(jīng)MTT和臺盼藍染色法檢測PMS-1077對細胞增殖的抑制作用；克隆形成率實驗檢測經(jīng)藥物處理后兩種細胞形成克隆的能力；流式細胞技術檢測PMS-1077對兩種細胞的細胞周期的影響，后面的實驗分成兩部分，其一，用PMS-1077處理HL-60細胞48h后，用流式細胞技術檢測HL-60細胞表面分化抗原表達的改變；聚苯乙烯乳膠顆粒實驗檢測HL-60細胞吞噬能力的變化，其

3、二，AO/EB染色實驗和Annexin V/PI雙染實驗檢測經(jīng)藥物處理48h后Raji細胞的凋亡狀況。 結果：不同濃度PMS-1077處理細胞24，48，72h后，MTT和臺盼藍染色的實驗表明該化合物對兩種細胞的增殖都有很強的抑制作用，且有濃度和時間依賴關系，最高抑制率可達100％；克隆形成率實驗證明該藥物能抑制兩種細胞在軟瓊脂上形成克隆的能力，在80μM以上，克隆抑制率達到100％；經(jīng)PMS-1077處理24h和48h后，流式

4、細胞技術檢測結果顯示該化合物能使兩種細胞阻滯在G0/G1期，且HL-60細胞沒有凋亡峰出現(xiàn)，Raji細胞在100μM時有13.9％的凋亡峰出現(xiàn)，且呈濃度依賴關系，提示該化合物誘導HL-60細胞分化，誘導Raji細胞凋亡；PMS-1077處理HL-60細胞48h后流式細胞技術檢測HL-60細胞表面分化抗原CD11b，CD14，CD15，CD13，CD34，HLA-DR，結果顯示CD11b，CDl4，CD34顯著增加，CD15，CD13，H

5、LA-DR無顯著變化，表明HL-60向單核/巨噬細胞方向分化；聚苯乙烯乳膠顆粒吞噬實驗證明HL-60細胞出現(xiàn)了吞噬功能，在40μM時，吞噬率為52％，且細胞形態(tài)變得不規(guī)則，細胞表面出現(xiàn)了突起和馬蹄形細胞核，提示該細胞可能分化為吞噬細胞；Raji細胞經(jīng)PMS-1077處理48h后，AO/EB染色實驗和Annexin V/PI雙染實驗證明Raji細胞經(jīng)PMS-1077處理48h后，細胞是通過凋亡而不是壞死途徑抑制細胞增殖，且凋亡呈濃度依賴關