尼莫地平加強阿糖胞苷誘導(dǎo)HL-60細胞凋亡的機制研究.pdf

1、目的研究尼莫地平(nimodipine NMDP)在加強阿糖胞苷(cytarabine Ara-c)誘導(dǎo)HL-60細胞凋亡中的作用機制.為尼莫地平在臨床上逆轉(zhuǎn)白血病耐藥提供理論依據(jù).方法取對數(shù)生長期的HL-60細胞株,隨機分為一個空白對照組(A)和三個不同實驗組(B:NMDP、C:Ara-c、D:NMDP+Ara-c),于不同培養(yǎng)時間取HL-60細胞進行Giemsa染色,光學(xué)顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學(xué)變化.并在同期提取HL-60細胞的DN

2、A,瓊脂糖凝膠電泳檢測凋亡細胞的DNA碎片.同時采用細胞免疫組化方法檢測凋亡細胞的凋亡相關(guān)基因bcl-2、bax的蛋白表達.結(jié)果A組細胞24小時無變化.實驗組細胞自培養(yǎng)8小時起,HL-60細胞可見不同程度的變形、體積變小、出泡,小泡散落于細胞周圍.細胞和小泡仍保持膜的完整性.隨著培養(yǎng)時間延長,出泡細胞增加,細胞體積變小,密度減少,且伴有細胞壞死現(xiàn)象.Giemsa染色可見核膜裂解,染色質(zhì)呈紫紅色或藍紫色,分割成塊狀,濃縮、靠近核膜,呈邊集

3、現(xiàn)象,并具有典型的凋亡小體形成.瓊脂糖凝膠電泳發(fā)現(xiàn)典型的DNA梯形凋亡帶.Bcl-2蛋白表達在實驗組隨培養(yǎng)時間延長逐漸下降,在8h時D組明顯低于A組(P<0.5).16h時實驗組均低于A組,實驗組D和B、C之間差異也有差異.24h時實驗組D和B間仍有差異(P<0.05).Bax蛋白的表達在實驗組隨時間延長而增加,8小時C、D組明顯高于A組,出現(xiàn)差異(P<0.05),24小時各實驗組與對照組間有顯著差異(P<0.01),但各實驗組在同一時

4、間內(nèi)無明顯差別(P>0.05).Bcl-2/Bax蛋白表達隨著培養(yǎng)時間延長,對照組Bcl-2/Bax比值無明顯變化(P>0.05);而實驗組Bcl-2/Bax比值逐漸下降,8小時與對照組出現(xiàn)差異(P<0.05),其中A組和D組間有顯著差異(P<0.01).16小時D和B、C組間也有差異(P<0.05),24小時各實驗組間無明顯差異(P>0.05).結(jié)論1.尼莫地平具有誘導(dǎo)HL-60細胞凋亡的作用,Bcl-2蛋白表達下調(diào)和Bax蛋白表達上