實(shí)施乙型肝炎疫苗免疫20年后中國(guó)東南部海島地區(qū)乙肝血清和分子流行病學(xué)研究.pdf

1、本課題共分為兩個(gè)部分:
　　第一部分海島地區(qū)乙型病毒性肝炎血清流行病學(xué)研究。
　　目的:
　　通過(guò)乙型病毒性肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查，了解乙型肝炎疫苗免疫計(jì)劃實(shí)施20年后，浙江省海島全年齡層人群乙型肝炎病毒(HBV)的流行現(xiàn)狀和影響因素，對(duì)海島地區(qū)的乙肝防治效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。本研究為免疫時(shí)代海島乙肝血清流行病學(xué)最新調(diào)查結(jié)果，對(duì)于評(píng)價(jià)乙肝防治特別是疫苗接種效果，及時(shí)調(diào)整乙肝免疫和控制策略，有效指導(dǎo)浙江省乙肝防治“十二五”規(guī)劃目標(biāo)

2、均具有十分重要的理論和實(shí)踐意義。
　　方法:
　　(1)抽樣方法:采用多階段分層隨機(jī)整群抽樣的方法，將浙江省舟山和玉環(huán)兩個(gè)海島上的常住居民作為研究總體。首先，根據(jù)經(jīng)濟(jì)水平，將每個(gè)地區(qū)所有鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道分為高、中、低三層。每層隨機(jī)抽取1個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道，其次，在每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道按照經(jīng)濟(jì)水平，隨機(jī)抽取3個(gè)自然村/社區(qū)。共抽取6個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道，18個(gè)自然村/社區(qū)，共調(diào)查15878人。
　　(2)調(diào)查方法:對(duì)每個(gè)調(diào)查對(duì)象按統(tǒng)一調(diào)查表進(jìn)行詢

3、問(wèn)調(diào)查，同時(shí)采集靜脈血，分離血清，低溫保存，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。
　　(3)檢測(cè)方法:用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗體(Anti-HBs)和乙肝病毒核心抗體(Anti-HBc)。檢測(cè)在杭州艾迪康生物檢測(cè)有限公司進(jìn)行。使用艾康生物技術(shù)（杭州）有限公司的ELISA試劑，檢測(cè)儀器為日本BIO-RAD公司生產(chǎn)的680型酶標(biāo)分析儀。同時(shí)采用IFCC速率法，對(duì)每個(gè)對(duì)象進(jìn)行丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測(cè)，

4、采用美國(guó)貝克曼CX7全自動(dòng)生化分析儀，試劑盒購(gòu)于北京利德曼生化股份有限公司。對(duì)表面抗原陽(yáng)性的≥30歲的人群以社區(qū)為單位進(jìn)行肝癌的初步篩選，甲胎蛋白(AFP)檢測(cè)采用ELISA法，試劑盒購(gòu)自鄭州博賽生物技術(shù)股份有限公司，若AFP陽(yáng)性的患者再行肝臟B超檢查，肝臟彩超檢查由各個(gè)社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心放射科的醫(yī)生進(jìn)行。
　　(4)統(tǒng)計(jì)方法:應(yīng)用WHO推薦的資料統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。統(tǒng)計(jì)方法采用卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為雙側(cè)α=0.05

5、。p＜0.01被認(rèn)為具有顯著性差異。
　　結(jié)果:
　　在玉環(huán)和舟山兩個(gè)海島地區(qū)14997個(gè)有效常住被檢樣本中，共有1763個(gè)樣本被檢測(cè)出HBsAg陽(yáng)性，標(biāo)化后陽(yáng)性率為10.4％;總體的Anti-HBc陽(yáng)性率標(biāo)化后為33.1％。調(diào)查人群男性HBsAg陽(yáng)性率、Anti-HBs、Anti-HBc陽(yáng)性率分別為13.51％、56.9％、39.3％。調(diào)查人群女性HBsAg陽(yáng)性率、Anti-HBs陽(yáng)性率、Anti-HBc陽(yáng)性率分別為10.

6、6％、57.0％、40.2％。ALT陽(yáng)性率為8.2％，其中男、女陽(yáng)性率分別為12.0％，5.8％。年齡大于30歲并且HBsAg陽(yáng)性者中，ALT陽(yáng)性率為0.6％。海島地區(qū)之間，海島地區(qū)與其他地區(qū)之間的乙肝流行率均存在顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　對(duì)比1979年，1992年和2006年開(kāi)展的全國(guó)范圍的三次病毒性肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查，我國(guó)海島地區(qū)的HBsAg攜帶率呈逐年下降的趨勢(shì)，但是下降速度遠(yuǎn)不及內(nèi)陸其他地區(qū)。我們的研究顯示，浙

7、江省海島地區(qū)目前仍為HBV高流行地區(qū)。實(shí)施乙型肝炎疫苗免疫20年來(lái)，海島地區(qū)兒童HBV流行強(qiáng)度顯著低于青年人和成人，且人群Anti-HBs流行率已達(dá)到較高水平，但是不同地區(qū)、不同海島間，不同性別仍存在顯著差異。我們的研究還發(fā)現(xiàn)，海島地區(qū)肝癌潛在發(fā)生率相對(duì)較高。政府應(yīng)該更加關(guān)注海島上活躍的流動(dòng)人口，并采取擴(kuò)大免疫人群等防治措施來(lái)控制乙肝流行。
　　第二部分乙肝感染者的血清分子流行病學(xué)研究與相關(guān)性分析。
　　目的
　　通過(guò)

8、乙型病毒性肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查，了解乙型肝炎疫苗免疫計(jì)劃實(shí)施20年后，浙江省乙肝感染者的血清學(xué)標(biāo)志物流行情況，并對(duì)海島地區(qū)篩查出的乙肝感染者對(duì)照平原地區(qū)的乙肝感染者做進(jìn)一步的分層研究（進(jìn)一步檢測(cè)乙肝三系定量，HBV-DNA，ALT，AFP，B超），了解不同地域背景下e抗原流行現(xiàn)狀和影響因素，并開(kāi)展血清學(xué)標(biāo)志物與HBV-DNA和ALT之間的相關(guān)性研究。以取得最新的數(shù)據(jù)指導(dǎo)該群體的治療和預(yù)后研究。
　　方法
　　(1)抽樣方法:

9、
　　采用多階段分層隨機(jī)整群抽樣的方法。首先，根據(jù)浙江省的兩大主要地貌（平原和海島）選擇紹興縣和玉環(huán)縣，每個(gè)地區(qū)根據(jù)經(jīng)濟(jì)水平，將所有鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道分為高、中、低三層。每層隨機(jī)抽取1個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道，其次，在每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道再根據(jù)經(jīng)濟(jì)水平，隨機(jī)抽取3個(gè)自然村/社區(qū)。共抽取6個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道，18個(gè)自然村/社區(qū)，我們對(duì)這18個(gè)社區(qū)的居民開(kāi)展乙肝HBsAg檢測(cè)，篩查出的HBsAg陽(yáng)性的乙肝感染者作為我們的實(shí)驗(yàn)人群，共獲有效調(diào)查對(duì)象8439人。

10、　　(2)調(diào)查方法:
　　問(wèn)卷調(diào)查采用集中與入戶相結(jié)合的調(diào)查方法，由經(jīng)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的調(diào)查員按照統(tǒng)一調(diào)查問(wèn)卷，對(duì)每個(gè)參與者進(jìn)行面對(duì)面的調(diào)查，同時(shí)采集靜脈血，分離血清，低溫保存，送檢相關(guān)指標(biāo)。
　　(3)檢測(cè)方法:
　　采用熒光定量PCR法，實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)HBV-DNA載量。檢測(cè)在通過(guò)衛(wèi)生部PCR實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證的基因診斷實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，使用國(guó)產(chǎn)杭州博日科技有限公司提供的FO-33A型PCR擴(kuò)增儀，試劑購(gòu)自艾康生物技術(shù)（杭州）有限公司

11、。同時(shí)，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清學(xué)標(biāo)志物，選用杭州艾康生物科技公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒。操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)，用酶標(biāo)儀(MULTISKAN MK3)讀取和記錄結(jié)果。此外，采用美國(guó)貝克曼CX7全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)ALT，試劑盒購(gòu)于北京利德曼生化股份有限公司，操作按試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)判斷結(jié)果。
　　(4)統(tǒng)計(jì)方法:
　　采用EpiData3.1軟件建立調(diào)查數(shù)據(jù)庫(kù)，嚴(yán)格按照雙錄入的要求統(tǒng)一錄入，應(yīng)用WHO

12、推薦的資料統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。統(tǒng)計(jì)方法采用卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為雙側(cè)α=0.05。p＜0.01被認(rèn)為具有顯著性差異。
　　結(jié)果
　　調(diào)查對(duì)象為HBsAg陽(yáng)性的感染者，40-49歲的人群的比例達(dá)到最高，為33.2％;乙肝感染者HBeAg陽(yáng)性率為18.5％，其中＜20歲和＞70歲人群HBeAg陽(yáng)性率分別為60％和9.2％;男、女性HBeAg陽(yáng)性率分別為21.9％、14.7％，兩者有顯著性差異;玉環(huán)、紹興地區(qū)的HB

13、eAg陽(yáng)性率分別為為21.9％、12.9％，兩者有顯著性差異;HBeAg陽(yáng)性的人中HBV-DNA陽(yáng)性率為91.0％，HBeAg陰性的人中HBV-DNA陽(yáng)性率為45.4％，有顯著性差異;在HBV-DNA小于103，103～105，105～107，大于107的人群中HBeAg陽(yáng)性率分別為3.6％，6.0％，41.1％，94.0％，不同水平的HBV-DNA的人群中HBeAg陽(yáng)性率有很大的差異;對(duì)HBV-DNA和HBeAg定量進(jìn)行Spearma

14、n秩相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)二者有一定的線性關(guān)系(p＜0.01)，但是相關(guān)性較弱(r=0.394＜0.4)，對(duì)HBeAg陽(yáng)性患者的HBV-DNA和HBeAg定量進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)二者有一定的線性關(guān)系(p＜0.01)，并且正相關(guān)性強(qiáng)(r=0.777＞0.7);HBV-DNA陽(yáng)性率在HBeAg陽(yáng)性并且ALT升高的人群中為95.4％，在HBeAg陽(yáng)性但ALT正常的人群中為86.4％，兩組間有顯著的差異(p＜0.01)。HBV-DNA陽(yáng)

15、性率在HBeAg陰性并且ALT升高的人群中為59.6％，在HBeAg陰性但ALT正常的人群中為41.5％，兩組間也有顯著的差異(p＜0.01)。
　　結(jié)論
　　與1992年浙江省病毒性肝炎流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果相比，海島地區(qū)的乙肝感染者高發(fā)人群的年齡已從1992年報(bào)道的0-9歲和30-39歲推遲到40-49歲，乙肝e抗原在感染者中的流行率與年齡、性別、地域均有重要關(guān)系，研究顯示HBV-DNA和HBeAg定量呈一定的線性關(guān)系，在HB