鐵皮石斛病原真菌分離與鑒定及印度梨形孢促生作用研究.pdf

1、鐵皮石斛，蘭科石斛屬多年生植物，常附生于密林樹干或巖石上?，F(xiàn)代藥理學研究及臨床應用結果證明鐵皮石斛具有增強機體免疫力，促進消化，護肝利膽等作用，在醫(yī)用、食用及保健領域均有著廣泛的應用前景。然而，野生鐵皮石斛資源稀少，隨著市場需求量的增加，越來越多的人選擇人工種植鐵皮石斛。
　　在鐵皮石斛種植和生長的過程中，常發(fā)生各種病害，目前對鐵皮石斛病害及其防治尚缺乏系統(tǒng)的研究。因此，本文主要在以下兩個方面進行了一些初步的探索:1、對引起鐵皮石

2、斛病害的病原菌進行分離和鑒定，同時，研究病原菌的生物學特性及對部分殺菌劑敏感性。2、測定了內生真菌印度梨形孢(Piriformospora indica)對鐵皮石斛的促生作用，并對印度梨形孢的轉化體系進行了初步探索。主要研究結果如下:
　　(1)通過鐵皮石斛病害樣本的采集和病原分離，以及形態(tài)學和分子生物學鑒定，共明確了4種常見鐵皮石斛病害的病原菌。分別是引起莖腐病鐵皮石斛白絹病的齊整小核菌Sclerotium rolfsii、引起

3、鐵皮石斛黑斑病的極細鏈格孢Alternaria tenuissima、引起鐵皮石斛莖腐病的磚紅鐮孢菌Fusarium incarnatum或層出鐮孢菌Fusarium proliferatum和引起鐵皮石斛灰霉病的的灰葡萄孢菌Botrytis cinerea。并對上述病原菌的生物學特性及對部分殺菌劑的敏感性進行了測定，發(fā)現(xiàn)齊整小核菌代表菌株Sr1在pH4～8，25℃～30℃時適合生長;極細鏈格孢代表菌株At1在pH5～5.7，20℃～3

4、0℃時適合生長;磚紅鐮孢菌代表菌株Fi1和層出鐮孢菌代表菌株Fp1均適合在pH＜7的偏酸性環(huán)境，25℃～30℃時生長;灰霉菌代表菌株Bc1更適合在pH＜7的偏酸性環(huán)境，20℃～25℃時生長。各病原菌代表菌株最適生長環(huán)境均與引起病害的發(fā)病規(guī)律相符。在測定碳、氮源培養(yǎng)基對病原菌影響實驗中發(fā)現(xiàn)且不同碳源對菌株Sr1、菌株Fi1、菌株Fp1、菌株Bc1的生長差異均顯著，菌株Sr1生長較好的碳源為甘露醇和淀粉，菌株Fi1生長較好的碳源為D-葡萄糖

5、、蔗糖和甘露醇，菌株Fp1在生長較好的碳源為甘露醇和L-阿拉伯糖，菌株Bc1生長較好的碳源為D-果糖和D-葡萄糖。而不同氮源處理對上述四種菌株(Sr1，F(xiàn)i1，F(xiàn)p1，Bc1)的生長影響均不顯著。而菌株At1在供試碳、氮源處理中均能很好的生長，生長差異不顯著，說明該菌株具有良好的生長適應能力。殺菌劑敏感性測定實驗表明木霉菌素、雷帕霉素、戊唑醇和異菌脲可選作白絹病的防治藥劑。咪鮮胺和異菌脲可選作黑斑病的防治藥劑。咪鮮胺可選作鐵皮石斛莖腐病

6、的防治藥劑，雷帕霉素對鐵皮石斛莖腐病具有一定防治效果，另外戊唑醇可用于防治由層出鐮孢菌造成的鐵皮石斛莖腐病。雷帕霉素、咪鮮胺和異菌脲可選作鐵皮石斛灰霉病的防治藥劑。另外木霉菌素對灰霉病菌的防效也較顯著。雷帕霉素和木霉菌素均為生物源農藥，所以在鐵皮石斛的病害防治中可以優(yōu)先使用。
　　(2)通過對實驗室鐵皮石斛組培苗以及田間實生苗的測定，發(fā)現(xiàn)印度梨形孢對鐵皮石斛的生長具有明顯的促進作用。實驗室內鐵皮石斛組培苗接種印度梨形孢60天后，接

7、菌苗分蘗多，與接種前比較，平均側芽增加數(shù)為6.2，而對照組平均側芽只增加了2.1，說明印度梨形孢有促進鐵皮石斛芽分化的作用。且接種組莖稈翠綠，葉片幼嫩而新鮮，生長勢明顯較對照組好，鮮重增長率達到109.43％，高出對照組18％。初步的實驗結果表明，印度梨形孢既可以增加鐵皮石斛的生長量，還有助于促進鐵皮石斛側芽的萌發(fā)與生長。另外，在了解印度梨形孢生活史的基礎上，采用多種細胞壁降解酶對印度梨形孢孢壁進行裂解，最后獲得了用溶壁酶高效裂解印度梨