冷卻牛肉儲(chǔ)藏過(guò)程中腐敗菌多樣性研究.pdf

1、本論文采用克隆建庫(kù)法、PCR-DGGE（變性梯度凝膠電泳）法以及純培養(yǎng)的方法初步比較分析了相同銷(xiāo)售條件下的未包裝冷卻牛肉與保鮮膜包裝冷卻牛肉中的微生物群落結(jié)構(gòu)。通過(guò)采用16SrDNA的V3區(qū)片段進(jìn)行PCR-DGGE（變性梯度凝膠電泳），同時(shí)利用16SrDNA全長(zhǎng)序列，通過(guò)克隆文庫(kù)技術(shù)對(duì)兩個(gè)樣品的微生物群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究。與此同時(shí)利用常用純培養(yǎng)的方法，根據(jù)細(xì)菌的菌落形態(tài)、菌落顏色、革蘭氏染色等常見(jiàn)特征，從市售冷卻牛肉中，選取菌落形態(tài)差別比較

2、明顯的菌株進(jìn)行研究。 通過(guò)分子克隆的方法研究發(fā)現(xiàn)：微生物群落結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出較大的差異。保鮮膜包裝冷卻牛肉共有6個(gè)OTU（Operational Taxonomic Unit），主要為L(zhǎng)actococcus（乳球菌屬，28％），Lactobacillus（乳桿菌屬，26％），Carnobacterium（肉品桿菌屬，18％）和Brochothrix（索絲菌屬，10％）；未包裝冷卻牛肉則共得到18個(gè)OTU，主要是Lactococcus（

3、乳球菌屬，28％），Brochothrix（索絲菌屬，18％），Acinetobacter（不動(dòng)桿菌屬，11％）。結(jié)果表明，保鮮膜包裝對(duì)于葡萄球菌屬以及冷桿菌屬等一些細(xì)菌都起到了一定的抑制作用。 通過(guò)純培養(yǎng)的方法研究發(fā)現(xiàn)：從未包裝冷卻牛肉和保鮮膜包裝冷卻牛肉中挑選出差異較明顯的菌株共32株，其中保鮮膜包裝冷卻牛肉樣品共12株，未包裝冷卻牛肉樣品共20株；同時(shí)選取兩樣品中的優(yōu)勢(shì)菌株各4株進(jìn)行進(jìn)一步的研究（8株細(xì)菌編號(hào)為：S01-S

4、08，其中S01-S04為未包裝冷卻牛肉樣品：S05-S08位保鮮膜包裝冷卻牛肉樣品），通過(guò)ARDRA（AmplifiedribosomalDNArestrictionanalysis）以及16SrDNA序列等進(jìn)行分類(lèi)研究，確定該細(xì)菌的分類(lèi)地位，并結(jié)合形態(tài)、常規(guī)生理生化特性進(jìn)行鑒定，確定各細(xì)菌所屬種。實(shí)驗(yàn)表明：S01為假單胞菌屬中的惡臭假單胞菌（Pseudomonas.putida），S02為希瓦氏菌屬下的（Shewanella.cin

5、ciasp.），而S03和S05為希瓦氏菌屬下的腐敗希瓦氏菌（Shewanella.putrefaciens），S04為窄食單胞菌屬中的嗜麥芽窄食單胞菌（Stenotrophomonasmaltophilia），S06為嗜冷桿菌（Psychrobactersp.），S07為葡萄球菌屬中的松鼠葡萄球菌（Staphylococcus.sciuri），S08為微桿菌屬中的產(chǎn)左聚糖微桿菌（Microbacterium.laevaniforman