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文檔簡介
1、本研究以三價融合基因Rirol為目的基因,通過農桿菌介導方法轉化八棱海棠,以期獲得矮化、耐缺鐵、抗冷、旱和鹽堿的優(yōu)良轉基因蘋果砧木。通過研究影響農桿菌介導的八棱海棠遺傳轉化的因素,優(yōu)化了八棱海棠遺傳轉化體系,建立了高效遺傳轉化體系,獲得了攜帶Rirol基因的蘋果砧木新種質。實驗內容和研究結果如下: 1.建立了八棱海棠高效的遺傳轉化體系: 研究了農桿菌菌株類型、vir基因誘導因子、Km加入時間、白化處理及懸浮液pH值對八棱
2、海棠遺傳轉化的影響,建立了以LBA4404為侵染菌,以MS<,0>+KH<,2>PO<,4>0.1mmol/L+1.0%蔗糖+0.5%葡萄糖+1mmol/L脯氨酸+75μmol/L OH-AS pH5.6為懸浮液活化菌株,侵染后葉片放到再生培養(yǎng)基上(MS+BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L)共培養(yǎng)兩天,然后轉入延后培養(yǎng)基(MS+BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L+cef 250mg/L),延后到再生苗高2cm時,將苗轉入選擇
3、培養(yǎng)基(MS+BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L+Km50mg/L)進行選擇培養(yǎng)的遺傳轉化體系。實驗結果表明,抗性苗出現(xiàn)頻率達8.4%。 2.獲得了攜帶Rirol基因的蘋果砧木新種質: 在上述體系優(yōu)化過程中獲得了84個卡那霉素抗性轉化株系,其中Gus檢測陽性的株系有65株。對65株Gus陽性株系中的24個株進行PCR擴增檢測,19個株系出現(xiàn)了與陽性質粒相同的條帶。隨機取5株PCR陽性株系,進行Southern雜交檢
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