農(nóng)桿菌介導(dǎo)三價融合基因（Rirol）轉(zhuǎn)化八棱海棠的研究.pdf

1、本研究以三價融合基因Rirol為目的基因，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法轉(zhuǎn)化八棱海棠，以期獲得矮化、耐缺鐵、抗冷、旱和鹽堿的優(yōu)良轉(zhuǎn)基因蘋果砧木。通過研究影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)的八棱海棠遺傳轉(zhuǎn)化的因素，優(yōu)化了八棱海棠遺傳轉(zhuǎn)化體系，建立了高效遺傳轉(zhuǎn)化體系，獲得了攜帶Rirol基因的蘋果砧木新種質(zhì)。實驗內(nèi)容和研究結(jié)果如下： 1.建立了八棱海棠高效的遺傳轉(zhuǎn)化體系： 研究了農(nóng)桿菌菌株類型、vir基因誘導(dǎo)因子、Km加入時間、白化處理及懸浮液pH值對八棱

2、海棠遺傳轉(zhuǎn)化的影響，建立了以LBA4404為侵染菌，以MS<,0>+KH<,2>PO<,4>0.1mmol／L+1.0％蔗糖+0.5％葡萄糖+1mmol／L脯氨酸+75μmol／L OH-AS pH5.6為懸浮液活化菌株，侵染后葉片放到再生培養(yǎng)基上(MS+BA4.0mg／L+NAA0.2mg／L)共培養(yǎng)兩天，然后轉(zhuǎn)入延后培養(yǎng)基(MS+BA4.0mg／L+NAA0.2mg／L+cef 250mg／L)，延后到再生苗高2cm時，將苗轉(zhuǎn)入選擇

3、培養(yǎng)基(MS+BA4.0mg／L+NAA0.2mg／L+Km50mg／L)進(jìn)行選擇培養(yǎng)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。實驗結(jié)果表明，抗性苗出現(xiàn)頻率達(dá)8.4％。 2.獲得了攜帶Rirol基因的蘋果砧木新種質(zhì)： 在上述體系優(yōu)化過程中獲得了84個卡那霉素抗性轉(zhuǎn)化株系，其中Gus檢測陽性的株系有65株。對65株Gus陽性株系中的24個株進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測，19個株系出現(xiàn)了與陽性質(zhì)粒相同的條帶。隨機(jī)取5株P(guān)CR陽性株系，進(jìn)行Southern雜交檢