鐵載體蛋白基因（IRT1）轉(zhuǎn)化八棱海棠的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)室原有八棱海棠再生體系的基礎(chǔ)上，主要采用了農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將IRTl基因轉(zhuǎn)入八棱海棠中，獲得了7個(gè)攜帶IRTl基因的八棱海棠株系。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)還初步探討了利用超聲波輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法在煙草和八棱海棠基因轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用。研究結(jié)果如下： 1．超聲波輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法(SAAT Sonication-assisted．Agnobacterium-mediated transformation)對模式植物煙草K326的基因遺傳轉(zhuǎn)化有非

2、常明顯的促進(jìn)作用。在與單獨(dú)用農(nóng)桿菌侵染的對照的比較中我們發(fā)現(xiàn)，在農(nóng)桿菌侵染的過程中輔助超聲波處理，能獲得100％的gus基因瞬時(shí)表達(dá)率，并且外植體的染色面積大多大于50％。在用SAAT法將外源基因?qū)霟煵莸倪^程中，超聲波處理時(shí)間和處理強(qiáng)度是影響轉(zhuǎn)化效率的最主要因素。比較實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，超聲波處理的時(shí)間和強(qiáng)度應(yīng)該適度。綜合這兩大因素，強(qiáng)度為80％的超聲波處理40s能獲得最高的瞬時(shí)表達(dá)率。另外，研究還發(fā)現(xiàn)，超聲波處理時(shí)期也對外植體的轉(zhuǎn)化效率有一定

3、影響，認(rèn)為在農(nóng)桿菌侵染4min 40s后輔助超聲波處理能獲得最理想的轉(zhuǎn)化率。2．通過SAAT法在煙草轉(zhuǎn)化中的運(yùn)用，我們初步探討了該種方法在目標(biāo)植物八棱海棠轉(zhuǎn)化體系中的應(yīng)用前景。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，適宜的超聲波輔助處理能夠比單獨(dú)使用農(nóng)桿菌更為有效地將外源基因?qū)氲桨死夂Ｌ闹腥?。?shí)驗(yàn)結(jié)果表明，最佳處理是在農(nóng)桿菌侵染4min 40s后輔助功率為70w的超聲波處理20s，此時(shí)外植體的Gus瞬時(shí)表達(dá)率為60％，并且外植體的褐化率低于23.3％。另外，比較發(fā)