通脈丸有效組分配伍減毒研究.pdf

1、　　目的：以中藥藥代動力學(xué)方法對通脈丸方中有效組分配伍后的減毒情況進行研究,為臨床合理用藥提供依據(jù),也為通脈丸最終開發(fā)為安全有效的組分中藥奠定良好的基礎(chǔ)。
　　方法：1、大鼠血漿樣品中士的寧檢測方法的建立。色譜條件為：Waters Acquity UPLC BEH C18色譜柱(2.1×50mm,1.7μm)；流動相：乙腈-酸水(23：77),酸水：0.02mol·L-1磷酸二氫鉀與0.01mol·L-1庚烷磺酸鈉等量混合,并用

2、10%磷酸調(diào)體系pH為2.5；流速0.18mL·min-1；檢測波長260nm；柱溫30℃；進樣量1μL。將含藥的大鼠血漿在堿性條件下經(jīng)甲基叔丁基醚二次萃取后進樣分析。2、通脈丸方有效組分配伍濃縮液中士的寧的含量測定。對通脈丸方中各味中藥進行分析,結(jié)合藥效及毒性等特點將處方中各味中藥分為八組,“兩頭尖、附子、馬錢子”為一組,“黃芪、當歸”為一組,“丹參、赤芍”為一組,蜂蜜、甘草、陳皮、琥珀和洋金花分別各為一組。按照正交設(shè)計表L8(27)

3、將其中除去“兩頭尖、附子、馬錢子”這一組之外的七組為七個因素,得到八種不同配比,將其分別與“兩頭尖、附子和馬錢子”按照處方量配伍制備出八組藥物,以方法1建立的超高效液相色譜法測定八組藥物中士的寧的含量,以士的寧的含量為指標,各組分別與通脈丸原方組(第 1 組)進行比較,計算各組減毒率,得出最主要的影響因素。3、開展對通脈丸有效組分配伍濃縮液在大鼠體內(nèi)毒代動力學(xué)的研究。正常大鼠每組5只,每只大鼠給予通脈丸有效組分配伍濃縮液28.8g·kg

4、-1灌胃,分別于灌胃后2h、4h、6h、24h、28h、31h、48h、52h、55h取血,以方法1建立的超高效液相色譜法檢測大鼠血漿中士的寧的濃度。所得的計量資料采用均數(shù)±標準差(x?± s)表示,應(yīng)用Winnonlin 5.2計算各組的毒代動力學(xué)參數(shù),應(yīng)用SPSS19.0進行t檢驗,與通脈丸原方組(第1組)比較,得到各個參數(shù)的P值,以AUC為研究對象,計算各組AUC減少率,得出各組的減毒作用強弱。
　　結(jié)果：1、在已建立的U

5、PLC條件下,所測士的寧的峰形良好,無內(nèi)源性物質(zhì)干擾,線性關(guān)系良好,最低檢測濃度為0.0432μg·mL-1,血漿的提取回收率較高,日內(nèi)、日間RSD均小于10%,具有良好的穩(wěn)定性。2、通脈丸方有效組分配伍濃縮液中士的寧的含量測定的結(jié)果如下：第 1 組：155.963μg·mL-1,第 2 組：136.064μg·mL-1,第 3 組：651.408μg·mL-1,第4組796.986μg·mL-1,第5組：104.748μg·mL-1,

6、第6組：50.496μg·mL-1,第7組：912.607μg·mL-1,第8組：50.759μg·mL-1,計算各組的減毒率結(jié)果如下：第2組為：12.8%,第3組為：﹣318%,第4組為：﹣411%,第5組為：32.8%,第6組為：67.6%,第7組為：﹣485%,第8組為：67.5%。3、各組通脈丸方有效組分配伍濃縮液 的 主 要 代 謝 參 數(shù) 分 別 如 下 ： Cmax 分 別 為 (0.4868±0.0825)μg·mL-1

7、 、(0.4039±0.1446)μg·mL-1 、 (0.4920±0.1520)μg·mL-1 、 (0.4256±0.1102)μg·mL-1 、(0.3154±0.0602)μg·mL-1 、 (0.1834±0.0506)μg·mL-1 、 (0.5158±0.2351)μg·mL-1 、(0.522±0.03665)μg·mL-1,Tmax分別為(26.4±2.19)h、(27.2±1.79)h、(28.0±0.0)h、(2

8、8.0±0.0)h、(26.4±2.19)h 、 (24.0±0.0)h 、 (26.4±21.9)h 、 (25.6±2.19)h , AUC ( 0-t ) 分 別 為(10.2719±3.2247)μg·mL-1·h、(8.8061±1.2458)μg·mL-1·h、(13.4966±4.5825)μg·mL-1·h、(11.0315±2.8732)μg·mL-1·h、(9.9291±1.4997)μg·mL-1·h、(5.042

9、0±2.1712)μg·mL-1·h、(15.1362±6.3533)μg·mL-1·h 、 (5.7515±1.4928)μg·mL-1·h , AUC ( 0-∞ ) 分 別 為(10.7348±2.7305)μg·mL-1·h、(8.8741±1.2009)μg·mL-1·h、(13.5293±4.5873)μg·mL-1·h、(11.1190±2.8319)μg·mL-1·h、(10.0313±1.4517)μg·mL-1·h、

10、(5.3662±2.0484)μg·mL-1·h、(15.1771±6.2968)μg·mL-1·h、(6.1433±1.2158)μg·mL-1·h,T1/2分別為(9.3308±4.6030)h、(11.0215±3.4593)h 、 (6.6564±1.9452)h 、 (14.7363±11.7127)h 、 (12.3706±7.1794)h 、(12.1122±7.9011)h 、 (6.3901±3.0695)h 、 (1

11、3.6511±2.701)h , CL 分 別 為(24.7691±5.7787)mL·h 、 (26.6705±3.0531)mL·h 、 (103.2669±48.1796)mL·h 、(122.7196±16.8454)mL·h 、 (17.2727±2.8873)mL·h 、 (15.8539±6.3360)mL·h 、(127.0582±54.3654)mL·h、(13.7174±2.7419)mL·h,VZ分別為(307.1

12、407±117.5452)mL、(426.8874±142.0070)mL 、 (1014.1898±580.8306)mL 、 (2736.1288±2467.5314)mL 、(296.8160±135.2676)mL 、 (224.8514±73.4985)mL 、 (1359.4926±1135.4140)mL 、(273.4620±84.8497)mL。各組分別與通脈丸原方(第1組)參數(shù)進行比較,第2組Cmax (P<0.05

13、)、AUC(0-t)(P<0.05)有顯著性差異,第3組Tmax(P<0.05)、Vz(P<0.05)有顯著性差異,第4組Tmax(P<0.05)有顯著性差異,第5組AUC(0-t)(P<0.05)有顯著性差異,第6組Tmax(P<0.05)有顯著性差異,第7組Cmax(P<0.05)、Tmax(P<0.05)、T1/2(P<0.05)、CL(P<0.05)、Vz(P<0.05)有顯著性差異,第8組AUC (0-t)(P<0.05)有顯

14、著性差異。各組分別與通脈丸原方(第1 組)的 AUC 進行比較,計算AUC減少率結(jié)果如下：第2組為：14.3%,第3組為：﹣31.4%,第4組為：﹣7.4%,第5組為：3.3%,第6組為：50.9%,第7組為：﹣47.4%,第8組為：44.0%。
　　結(jié)論：1、本課題對通脈丸方有效組分配伍濃縮液中士的寧的含量進行測定,對各組的測定結(jié)果進行統(tǒng)計分析,提示七個因素中“丹參、赤芍”是影響士的寧含量的最主要因素,“丹參、赤芍、琥珀、蜂蜜