Caveolin-1表達與大腸癌細胞增殖、血管生成的關(guān)系及其臨床意義.pdf

1、大腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，隨著我國人口老齡化、生活習(xí)慣、飲食結(jié)構(gòu)以及環(huán)境的改變，大腸癌的發(fā)病率呈上升趨勢。目前大腸癌病因卻尚未完全清楚，療效也不理想。如何更好地干預(yù)、阻斷大腸癌的發(fā)生發(fā)展是當前應(yīng)迫切解決的問題。諸多因素影響大腸癌的生長分化和侵襲轉(zhuǎn)移，其中包括多種(抑)癌基因。 窖蛋白-1(Caveolin-1)基因定位于7q31.1，該區(qū)域被認為含有腫瘤抑制基因。目前，對Caveolin-1在腫瘤中作用的研究結(jié)果并不一致：在

2、多數(shù)體外研究中，Caveolin-1起到腫瘤抑制因子的作用；然而，在很多回顧性臨床研究中Caveolin-1高表達與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)。 增殖細胞核抗原(Proliferating-cell nuclear antigen，PCNA)是真核細胞DNA聚合酶δ的推動因子，協(xié)調(diào)DNA復(fù)制過程。檢測PCNA在臨床上可作為反映細胞增殖的一項良好指標。 血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial gr

3、owth factor，VEGF)是促進血管生成的重要因子，在腫瘤的生長過程中，腫瘤細胞分泌VEGF急劇增加，能夠顯著增加腫瘤血管形成，加速腫瘤演進過程，表現(xiàn)出轉(zhuǎn)移特征。應(yīng)用CD34對腫瘤組織切片進行免疫組化染色并測量腫瘤微血管密度(microvessel density,MVD)，是目前常用的評價腫瘤血管生成情況的方法。 本研究旨在運用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，檢測人大腸癌和正常大腸黏膜Caveolin-1蛋白、PCNA、VEGF

4、、CD34的表達，探討它們的表達特點和相互關(guān)系，及其與大腸癌臨床、病理等生物學(xué)行為之間的關(guān)系。初步探討Caveolin-1蛋白在大腸癌發(fā)生和發(fā)展中的作用。 材料和方法: 1、大腸癌石蠟組織標本收集 1999年1月至2000年12月我院外科手術(shù)切除的原發(fā)性大腸癌標本76例。年齡59.1±12.6(歲)，男47例，女29例。其中隨診資料比較完整者有62例。取內(nèi)鏡和病理檢查未發(fā)現(xiàn)明顯異常的正常人大腸黏膜活檢組織24例作

5、為對照組。 2、主要試劑： 兔抗人Caveolin-1蛋白多克隆抗體(Santa Cruz公司)、鼠抗人VEGF單克隆抗體(Santa Cruz公司)、鼠抗人PCNA單克隆抗體(Dako公司)、鼠抗人CD 34單克隆抗體(Dako公司)。 3、實驗方法 用鏈霉素抗生物素蛋白-生物素-過氧化物酶免疫組織化學(xué)染色方法檢測大腸癌組織和正常大腸黏膜組織Caveolin-1蛋白表達、PCNA標記指數(shù)(PCNA La

6、bel Index，PCNA-LI)、VEGF蛋白表達及CD34標記的MVD。 4、統(tǒng)計學(xué)處理 計量資料的數(shù)據(jù)表示為均數(shù)±標準差。計量資料檢驗采用獨立樣本t檢驗、單向方差分析或秩和檢驗。計數(shù)資料比較采用四格表資料的Fisher's精確概率法檢驗或R×C表資料的x<'2>檢驗。相關(guān)分析采用Spearman rank test。生命曲線用Log-Rank檢驗，應(yīng)用COX模型進行單因素和多因素分析。 結(jié)果: 1

7、、大腸癌細胞Caveolin-1表達及其與患者臨床、病理特征的關(guān)系 大腸癌細胞Caveolin-1表達率(60.5﹪)高于正常大腸黏膜腺上皮細胞(33.3﹪)，差異有顯著性(P<0.05)。大腸癌細胞Caveolin-1表達與大腸癌患者年齡、性別、癌瘤生長部位、組織學(xué)分級及術(shù)后生存時間無明顯關(guān)系(P>0.05)。大腸癌細胞Caveolin-1表達率與Dukes分期有關(guān)，Dukes C期和D期高于Dukes A期和B期(P<0.0

8、5)。 76例大腸癌患者中，隨診資料比較完整者有62例，術(shù)后5年生存率為52.3±6.6(﹪)。其中Caveolin-1表達陽性組術(shù)后5年生存率為41.7±8.5(﹪)，陰性組為67.4±9.6(﹪)，Log-Rank檢驗顯示差異有顯著性(x<'2>=6.35，P=0.0118)。 2、大腸癌細胞Caveolin-1表達與PCNA表達、VEGF表達及MVD的關(guān)系 2.1、大腸癌細胞Caveolin-1表達與PCNA表達的

9、關(guān)系 PCNA-LI大腸癌為53.9±25.0(﹪)，正常大腸黏膜為18.9±9.7(﹪)，大腸癌PCNA-LI明顯增加(P<0.01)。Caveolin-1蛋白陽性者PCNA-LI為58.9±25.1(﹪)，顯著高于陰性者46.2±23.2(﹪)(P<0.05)；大腸癌細胞Caveolin-1表達和PCNA-LI有顯著的正相關(guān)(r=0.264，P=0.021)。 2.2、大腸癌細胞Caveolin-1表達與VEGF表達

10、的關(guān)系 24例正常大腸黏膜未見VEGF陽性表達。76例大腸癌中有60例VEGF陽性表達，占78.9﹪。Caveolin-1蛋白陽性者VEGF陽性率89.1﹪，顯著高于陰性者的633﹪(P<0.05)；大腸癌細胞Caveolin-1表達和VEGF表達率有非常顯著的正相關(guān)(r=0.309，P=0.007)。 2.3、大腸癌細胞Caveolin-1表達與MVD的關(guān)系 MVD大腸癌為(36.3±10.7)，正常大腸黏膜為

11、(18.7±6.4)，大腸癌MVD明顯高于正常大腸黏膜(P<0.01)。大腸癌細胞Caveolin-1蛋白陽性者的MVD(38.8±10.2)，顯著高于陰性者(32.5±10.4)(P<0.05)；大腸癌細胞Caveolin-1表達和MVD有顯著的正相關(guān)(r=0.274，P=0.016)。大腸癌VEGF表達陽性者MVD(38.2±10.6)，顯著高于陰性者(29.1±7.6)(P<0.01)；大腸癌VEGF陽性表達和MVD有非常顯著的正

12、相關(guān)(r=0.375，P=0.001)。在腫瘤浸潤邊緣，微血管較密集，此時VEGF表達也明顯，顯示了VEGF表達與新生血管化部位的一致性。 3、大腸癌患者預(yù)后影響因素的分析 COX風險比例函數(shù)模型分析顯示只有Dukes分期和Caveolin-1蛋白表達兩項變量進入最后分期。在控制Dukes分期因素在平均水平后得出的Caveolin-1蛋白表達在回歸方程中的死亡風險比為2.305，表明Caveolin-1蛋白表達者，其死亡

13、的相對風險增加2.305倍。 結(jié)論: 1．大腸癌細胞Caveolin-1蛋白表達率明顯增高；Caveolin-1表達與大腸癌Dukes分期相關(guān)，Caveolin-1蛋白陽性者臨床分期較晚；大腸癌細胞Caveolin-1蛋白陽性者術(shù)后5年生存率明顯低于Caveolin-1陰性者。 2．大腸癌細胞Caveolin-1蛋白表達可顯著上調(diào)PCNA-LI、VEGF蛋白表達及MVD，并有顯著的正相關(guān)，提示Caveolin-1