家蠶核糖體蛋白基因的染色體定位研究.pdf

1、家蠶的飼養(yǎng)歷史悠久，以家蠶為主體的產(chǎn)業(yè)及其附屬產(chǎn)業(yè)一直是我國(guó)的傳統(tǒng)優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)，家蠶是全變態(tài)型的昆蟲，各種性狀易于觀察，研究過程中積累了大批遺傳變異的品系，加上家蠶的多化性，其雌性個(gè)體所產(chǎn)后代數(shù)量很大，有利于遺傳學(xué)研究和突變體的篩選。家蠶作為鱗翅目昆蟲的典型代表和理想的生物學(xué)模型。在應(yīng)用上，除了蠶絲之外，家蠶還作為理想的生物反應(yīng)器也日益受到重視。此外，大部分為害農(nóng)林作物的害蟲與家蠶同屬于鱗翅目，對(duì)家蠶功能基因組的研究將直接推動(dòng)對(duì)鱗翅目昆蟲的

2、比較生物學(xué)等相關(guān)研究，有利于提高鱗翅目昆蟲的綜合治理水平。 中國(guó)完成了對(duì)家蠶基因組草圖的測(cè)序工作，隨之而來的是開展以增加遺傳圖譜密度、基因定位克隆、基因組精細(xì)圖譜構(gòu)建為主要內(nèi)容的研究，同時(shí)還有功能基因組的研究。據(jù)統(tǒng)計(jì)目前已經(jīng)定位在染色體上的基因較少，給基因的定位克隆和功能研究帶來了困難，因此篩選更多的分子標(biāo)記顯得非常重要。 核糖體蛋白基因(RPG)在蛋白合成中的作用十分重要。由于核糖體蛋白數(shù)量眾多，功能復(fù)雜，以及研究手段

3、的限制，其參與生命調(diào)控的作用機(jī)制還沒有完全了解。近年來研究表明，核糖體還是藥物作用的重要靶位，核糖體蛋白逐漸成為研究的熱點(diǎn)。2001年，Uechi等成功繪制出了人類全部80條核糖體蛋白基因的遺傳物理圖譜，將80條核糖體蛋白基因定位于2條性染色體和20條常染色體上。然而對(duì)于家蠶核糖體蛋白基因的染色體定位工作還缺少進(jìn)一步的相關(guān)研究。 為此，本研究以PCR為核心技術(shù)，進(jìn)行分子標(biāo)記的篩選工作，試驗(yàn)巧妙的利用家蠶的雌不交換特性，結(jié)合SSR

4、分子標(biāo)記遺傳連鎖圖譜，將家蠶部分核糖體蛋白基因定位到相應(yīng)的染色體上，為基因的進(jìn)一步精細(xì)定位和定位克隆奠定了基礎(chǔ)。試驗(yàn)用家蠶品種7019和F50B配制了新的回交種群，抽提了大小群體中200多個(gè)個(gè)體的基因組DNA。在Genbank上得到了家蠶80個(gè)核糖體蛋白基因的核酸序列，并結(jié)合生物信息的方法找到了每個(gè)核糖體蛋白基因?qū)?yīng)的Scaffold，以Scaffold為參考序列，每個(gè)對(duì)應(yīng)基因設(shè)計(jì)出相應(yīng)的特異引物，使用TD-PCR的方法進(jìn)行特異性擴(kuò)增，

5、并對(duì)沒有多態(tài)性的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了酶切試驗(yàn)分析，試驗(yàn)共獲得了14個(gè)新的分子標(biāo)記，通過新標(biāo)記和SSR遺傳連鎖圖譜的結(jié)合，將14個(gè)核糖體蛋白基因定位到了家蠶的10條染色體上。本研究的開展，有利于加快我國(guó)家蠶基因組學(xué)研究的進(jìn)程；有利于家蠶新基因的發(fā)現(xiàn)和定位克隆；有利于核糖體蛋白基因的進(jìn)一步深入研究；有利于推動(dòng)鱗翅目昆蟲的模式生物研究，為鱗翅目昆蟲功能基因組研究和系統(tǒng)生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)，在家蠶全基因組精細(xì)圖譜尚未完成的情況下，這項(xiàng)工作的開展具