幾丁質(zhì)酶基因及核糖體失活蛋白基因?qū)λ镜倪z傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、水稻是世界上最重要的糧食作物之一,但容易受到多種真菌病害的侵染,使其產(chǎn)量和品質(zhì)受到嚴(yán)重的威脅.實(shí)踐證明,最經(jīng)濟(jì)有效的、也是最根本的防治方法就是培育抗病品種.常規(guī)育種由于品種選育年限長(zhǎng)、抗源基因匱乏及隨病源生理小種的變化抗病性消失等原因,遠(yuǎn)不能滿足選育抗病品種的需求.利用基因工程技術(shù)進(jìn)行抗病育種是一條嶄新而有效的途徑.但水稻抗真菌病基因遺傳轉(zhuǎn)化中仍存在單個(gè)抗病基因的抑茵譜窄等問題;另外,現(xiàn)有的水稻遺傳轉(zhuǎn)化體系還存在著轉(zhuǎn)化頻率低等因素,難以

2、獲得大量的轉(zhuǎn)基因植株.該研究針對(duì)以上問題,構(gòu)建菜豆幾丁質(zhì)酶基因與大麥核糖體失活蛋白基因雙價(jià)植物表達(dá)載體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法轉(zhuǎn)化水稻(選用東北地區(qū)4個(gè)主栽水稻品種),系統(tǒng)優(yōu)化植株再生條件和遺傳轉(zhuǎn)化條件,建立高效的植株再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系.為水稻以及其它禾本科植物抗病分子育種奠定基礎(chǔ),并為有性雜交育種提供基因資源.主要研究結(jié)果如下:(1)構(gòu)建單價(jià)和雙價(jià)植物表達(dá)載體共構(gòu)建了5個(gè)載體,其中包括一個(gè)中間克隆載體pUchB,1個(gè)植物載體卡

3、盒p33EG,2個(gè)單基因植物表達(dá)載體p33EC、p33ECB,1個(gè)雙價(jià)植物表達(dá)載體p33ECR.(2)優(yōu)化水稻再生體系干燥處理可顯著提高水稻愈傷組織的分化效率,當(dāng)失去鮮重50％時(shí),水稻愈傷組織分化效率可提高2.0-4.6倍.通過改善移栽方法,顯著提高了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化抗性再生苗的移栽成活率.(3)優(yōu)化遺傳轉(zhuǎn)化體系并獲得轉(zhuǎn)基因植株采取分化階段篩選策略:水稻愈傷組織在增殖階段對(duì)PPT不敏感,而在分化階段對(duì)PPT敏感,PPT選擇壓力為0.7mg/L