納米金放大SPR雙通道同時(shí)檢測前列腺癌腫瘤標(biāo)志物f-PSA和t-PSA.pdf

1、前列腺癌已成為繼肺癌的第二大男性健康殺手，前列腺特異性抗原(prostate specific antigen，PSA)目前被認(rèn)為是前列腺癌最有效的生物標(biāo)志物并廣泛應(yīng)用于前列腺癌的臨床診斷。單獨(dú)檢測血清中的PSA含量來診斷前列腺癌容易造成誤診，尤其是在灰區(qū)（PSA濃度在4～10 ng·mL-1）前列腺癌與前列腺增生之間易誤診，而游離前列腺特異性抗原(fPSA)與總的前列腺特異性抗原(t-PSA)之比（f/t）被認(rèn)為是目前區(qū)分灰區(qū)前列腺癌

2、與前列腺增生最有效的方法。表面等離子體激元共振技術(shù)具有快速靈敏、檢測限低、免標(biāo)記、耗樣量少、實(shí)時(shí)監(jiān)測等特點(diǎn);已廣泛應(yīng)用于藥物的篩選、食品的分析檢測、環(huán)境監(jiān)測和重大疾病的臨床診斷等領(lǐng)域。納米金具有良好的生物親和性，在檢測中常被用來放大信號，將納米金應(yīng)用到SPR技術(shù)中能克服傳統(tǒng)的SPR技術(shù)很難直接檢測低濃度、小分子量的物質(zhì)的缺點(diǎn)。本文在研究中利用表面等離子體子共振技術(shù)靈敏度高、檢測限低的優(yōu)點(diǎn)，納米金放大信號，抗原抗體間的特異性結(jié)合，建立了一

3、種SPR雙通道同時(shí)檢測f-PSA和t-PSA的檢測方法。磁性納米粒子具有優(yōu)良的磁導(dǎo)向性、生物降解功能、生物親和性和活性能力基團(tuán)等性質(zhì)，廣泛用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。本文用化學(xué)法制備了直徑約為30 nm大小的Fe3O4@Au磁性納米材料，用紫外-可見吸光光度法、TEM對其進(jìn)行表征，粒徑分布均勻，分散性較好。
　　本論文的主要工作包括:
　　一、合成分散性較好直徑約為20 nm的納米金，用PSA antigen包裹納米金制備了金標(biāo)抗原探

4、針，在檢測過程中用來放大SPR信號。
　　二、探究了直接檢測法、免疫夾心法和抑制競爭法檢測f-PSA和t-PSA。因t-PSA在血清中的濃度較大，而且其分子量也較大，故可以對其直接檢測。f-PSA在0.05～0.4 ng·mL-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)線性范圍，t-PSA在1～20 ng·mL-1之間呈線性范圍。最后檢測實(shí)際樣品，得出正常人血清中f/t值為28.95％，前列腺增生患者的平均f/t值為22.40％，前列腺癌患者的平均f/t值為1

5、6.60％。所得的區(qū)分前列腺癌與前列腺增生的f/t值與文獻(xiàn)報(bào)道的接近，為前列腺癌的臨床診斷，灰區(qū)前列腺癌和前列腺增生的區(qū)分提供了新的檢測方法。
　　三、通過共沉淀法制備了粒徑較小的Fe3O4納米粒子，并用四甲基氫氧化銨做穩(wěn)定劑。以Fe3O4納米粒子為核，再利用檸檬酸鈉作還原劑還原HAuCl4，得到的Au包裹在Fe3O4外面制備Fe3O4@Au磁性納米粒子。通過紫外-可見吸光光譜和TEM對其進(jìn)行表征，并對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了摸索，最終制得